氯喹对戊四氮（PTZ）致痫大鼠脑内星形胶质细胞增殖周期、GFAP、和C-Fos表达的影响

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氯喹对戊四氮（PTZ）致痫大鼠脑内星形胶质细胞增殖周期、GFAP、和C-Fos表达的影响

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毕业论文范文题目：氯喹对戊四氮（PTZ）致痫大鼠脑内星形胶质细胞增殖周期、GFAP、和C-Fos表达的影响，论文范文关键词：氯喹对戊四氮（PTZ）致痫大鼠脑内星形胶质细胞增殖周期、GFAP、和C-Fos表达的影响
氯喹对戊四氮（PTZ）致痫大鼠脑内星形胶质细胞增殖周期、GFAP、和C-Fos表达的影响毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的:观察氯喹不同干预剂量对戊四氮(PentylenetrazolePTZ)慢性致痫大鼠脑内星形胶质细胞(astrocyte,Ast)增殖周期、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、c-Fos和周期素D1(CyclinD1)表达的影响。研究慢性癫痫状态及其氯喹干预时大鼠脑内Ast增殖、活化状态,探讨氯喹抗癫痫的作用机制以及最佳使用剂量。方法:实验一实验动物模型制作、分组、行为观察及细胞周期检测将60只健康雄性SD大鼠随机分为对照组(10只,按40mg/kg注射生理盐水,持续4周),50只用于制作慢性癫痫动物模型(按40mg/kg注射PTZ)。根据Racine评分标准分为5级,凡连续至少5次Ⅱ级以上发作者被认为造模成功。造模成功后给予维持量。将50只已成功致痫大鼠随机分为癫痫组(设为模拟干预组,注射40mg/kg生理盐水)和氯喹干预组,干预组又分为干预1组(注射20mg/kg氯喹)、干预2组(注射30mg/kg氯喹)、干预3组(注射40mg/kg氯喹)、干预4组（此处忽略..）(氯喹50mg/kg注射)4个亚组,每组10只。分别于PTZ注射、氯喹干预后2小时内观察并记录6组大鼠的行为表现和脑电变化。干预治疗2周后,采用3%水合氯醛(1ml/100g)麻醉,快速断头取脑,分离大脑皮质和海马。采用DNA倍体试剂盒对胶质细胞染色体进行染色,流式细胞仪检测细胞周期,观察各组细胞周期变化。实验二免疫组织化学检测GFAP、c-Fos、CyclinD1的表达按分组制备动物模型,方法同上。提取双侧大脑皮质和海马组织,4%多聚甲醛固定,常规组织处理、制片。采用免疫组织化学方法检测GFAP蛋白在不同组织中的表达,并观察各组GFAP阳性Ast形态、数量及GFAP表达水平的变化情况;同步检测c-Fos、CyclinD1蛋白在Ast中的表达。采用HPLAS-1000高清晰彩色病理图文分析系统进行图像分析,每组共计7只大鼠14张切片,每张切片在10×20倍视野下随机取10个视野,计数阳性细胞数量,取其平均值;同时测定阳性细胞的（略..）积分光密度,取其平均(OD)值。按步骤分组提取实验动物脑组织,采用Westernblot技术检测CyclinD1蛋白的表达。结果:1、行为学观察显示,大部分动物注射9天(d)后出现Ⅱ级以上发作,全部动物注射14d后均出现Ⅱ级以上发作。对照组无痫样发作,氯喹干预1组与癫痫组相比无显著性差异(P0.05);其余三个干预组与癫痫组相比均有显著性差异(P0.05)。其中干预3组药物不良反应较明显,并出现1只大鼠死亡,干预4组出现3只死亡。2、脑电图(electroencephalogramEEG)记录显示,对照组无痫样放电,癫痫组呈现频发高幅的尖波、棘波、棘慢波或棘慢复合波,干预组显示慢波和小棘波,随干预剂量的增加,癫痫波减弱。3、流式细胞学检测显示,PTZ致痫组皮质和海马区Ast增殖活性最强,S期所占比例平均为47%;对照组S期所占比例平均为0.5%。干预组随氯喹干预剂量增加,S期所占比例逐渐降低,各项检测指标趋于正常。4、免疫组化（此处忽略..）显示,癫痫组比正常对照组Ast数量显著增多(P0.001),且分布不均匀,细胞形态有显著改变,细胞体积明显增大,胞体突起增粗变长。而干预各组Ast数量依次逐渐减少,细胞形态有所恢复,各组与癫痫组比较差异有显著性(P0.01)。GFAP在致痫组表达强,以海马区为著,而干预各组GFAP表达均有不同程度降低,与癫痫组比较差异有显著性(P0.05);c-Fos在致痫组表达较强,与干预组比较差异有显著性,且随干预剂量的增加差异愈明显(P0.05);CyclinD1在致痫组呈高表达,与干预组比较有显著性差异(P0.05)。各项指标均显示,随着干预剂量的加大,Ast数量、活化状态出现逐渐减弱趋势,后趋于较稳定水平。5、Westernblot显示CyclinD1的含量在致痫组最多,四个干预组依次递减,各组与对照组比较均有显著性差异(P0.05)。结论:1、利用0.5%PTZ可成功复制大鼠慢性癫痫模型,癫痫持续状态与Ast过度增殖和活化密切相关。2、氯（本文此处忽略..）喹对慢性致痫大鼠癫痫发作状态具有一定的抑制作用,并且随干预剂量的增加抑制作用呈先增强后趋于某一稳定状态。3、氯喹可通过抑制Ast的增殖以及GFAP、C-Fos、CyclinD1的高表达,从而抑制慢性癫痫大鼠脑内Ast的增殖和活化,进而起到抗癫痫的作用。4、氯喹抗癫痫作用随干预剂量增加呈增强趋势,当氯喹干预剂量增加到一定值,药物不良反应增强,而干预效果增加不显著,最佳干预剂量范围是30mg-40mg/kg。本实验第2、3、4项结论国内外尚未见报道

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