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心肌细胞肥大的Ca~(2+)信号-转录偶联机制初步探讨
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毕业论文范文题目:
心肌细胞肥大的Ca~(2+)信号-转录偶联机制初步探讨
,论文范文关键词:
心肌细胞肥大的Ca~(2+)信号-转录偶联机制初步探讨
心肌细胞肥大的Ca~(2+)信号-转录偶联机制初步探讨毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】
:心肌重塑是多种心脏疾病共同的一种重要的病理过程,是指在各种内外因素的刺激下引起的原有心肌细胞的肥大以及心肌实质、间质和血管结构的重排。研究表明:在长时间循环和局部的神经体液因素(如NE、AngII、oxLDL、细胞因子、生长因子等)、物理因素(如缺氧、负荷过度、剪切力等)以及其他损伤因素作用下可以导致心肌重塑,其基本过程为各种损伤因素导致Ca2+稳态失衡并激活Ca2+信号通路,从而引起心肌细胞肥大和结构变化。我们在以往的2个NSFC中证实了心肌细胞核上存在Ca2+调节系统,证明了不同因素导致的心肌重塑涉及到核Ca2+调节系统,但心肌重塑中Ca2+稳态失衡和Ca2+信号通路与重塑相关基因表达的关系尚未完全阐明。本实验是研究Ca2+信号转导通路和心肌重塑相关基因表达的关系,以阐明心肌细胞内Ca2+信号转导通路的激活和阻断对引起心肌重塑的基因表达、蛋白合成的影响,并对刺激肥大因素引起的CREB磷酸化(Ser133)活化进行初步探讨。实验用1-2天的新生Wistar大鼠乳鼠,取心室组织进行心肌细胞原代培养,心肌细胞生长约4天后状态良好,进行分组实验。随机分成四组:①正常(本文此处忽略..)对照组;②刺激肥大组;③刺激肥大+Ca2+信号阻断组;④正常+Ca2+信号阻断组。刺激肥大和Ca2+信号阻断分两组进行:一组为NE刺激、Ca2+离子络合剂BAPTA阻断;另一组为AngII刺激、CaM阻断剂三氟拉嗪(trifluoperazine,TFP)阻断。加药后继续培养一定时间,然后分别取标本检测比较3H-leucine掺入率测定蛋白质合成,RT-PCR测定与心肌重塑相关的初级反应基因c-fos及次级反应β-MHCmRNA的表达以及用Western-blot检测核内磷酸化CREB(P-CREB,Ser133)的含量变化。主要结果如下:1.NE刺激组的心肌细胞3H-leucine摄入率比正常对照组高39%(P0.01),BAPTA可明显阻断NE刺激,降低75%(P0.01)。单纯BAPTA阻断组比正常对照组低72%(P0.01),单纯BAPTA阻断组和NE+BAPTA组间无显著差别(P0.05)。2.AngII刺激组的心肌细胞3H-leucine摄入率高于正常对照组17%(P0.05),TFP本课题由国家自然科学基金项目资助(No30201582)WP=9阻断AngII刺激后降低39%(P0.01)。单纯TFP阻断组的3H-leucine摄入率比正常对照组低32%(P(此处忽略..)0.01),单纯TFP阻断组和TFP+AngII刺激组无明显差别(P0.05)。3.NE刺激组的心肌细胞的β-MHC的表达丰度比对照组升高38%(P0.01),BAPTA阻断后降低43%(P0.01),单纯BAPTA阻断组β-MHC的表达明显低于正常组66%(P0.01)和NE+BAPTA组56%(P0.01)。4.NE刺激组可见C-fos表达,BAPTA阻断后降低至NE刺激组的12%(P0.01),C-fos在正常组及单纯BAPTA阻断组未见明显表达。5.AngII刺激组β-MHC比正常组表达明显升高45%(P0.01),TFP阻断后降低40%(P0.01),单纯TFP阻断组和正常组以及AngII+TFP组间均无显著差异(P0.05)。6.AngII刺激组可见C-fos表达,TFP阻断后C-fos表达显著抑制,降至AngII刺激组的22%(P0.01),C-fos基因在正常组及单纯TFP阻断组中未见明显表达。7.NE+BAPTA阻断组磷酸化CREB(P-CREB)量比NE刺激组降低36%(P0.01),而在正常及单纯BAPTA阻断组未检出明显P-CREB。结论:1.BAPTA不但抑制NE刺激引起的心肌细胞3H-leucine的摄入,而且抑制正常细胞的3H-leucine摄入,提示Ca2+信号通路不但参与细胞外(本文此处忽略..)刺激引起的心肌细胞蛋白合成增加和细胞肥大,并且在正常细胞蛋白质合成中也起重要作用。2.TFP可以阻断AngII刺激导致心肌细胞3H-leucine的摄入增加及正常细胞中的3H-leucine的摄入,提示AngII刺激导致心肌细胞肥大中,CaM是Ca2+信号参与促进心肌细胞蛋白合成的重要环节,并且在正常细胞的蛋白质合成中也发挥信号转导作用。3.心肌细胞中c-fos及β-MHCmRNA在NE的刺激下表达增多,BAPTA抑制后表达下降,提示NE刺激导致和心肌重塑相关的初级反应基因c-fos及次级反应基因β-MHC的过度表达需要通过激活心肌细胞Ca2+释放形成的Ca2+信号转导作用。并且在正常细胞中BAPTA也可抑制β-MHCmRNA的表达,表明非刺激情况下该基因的表达也需要Ca2+的信号转导。4.AngII的刺激促进心肌细胞中c-fos及β-MHCmRNA的表达,TFP可以抑制AngII的作用,提示AngII刺激促进心肌细胞重塑中,CaM参与了Ca2+信号的转导,促进和心肌重塑相关的初级反应基因c-fos及次级反应基因β-MHC的表达。但在正常细(此处忽略..)胞中,TFP不能抑制β-MHCmRNA的表达,表明心肌细胞在没有刺激的情况下,CaM在该基因表达中的作用不大。5.NE刺激可以促进核内CREB磷酸化而BAPTA可以抑制该变化。提示NE刺激WP=10是通过激活细胞内的Ca2+释放形成的Ca2+信号,再作用于转录因子CREB,使其磷酸化活化,通过P-CREB上游调节作用使一系列基因活化表达而导致心肌重塑。总之,本实验在NE和AngII刺激心肌细胞重塑的模型上,证实了Ca2+信号通路参与了心肌重塑核反应和基因表达的调节,其信号转导过程涉及到CaM的作用和CREB的磷酸化。
以上为本篇毕业论文范文
心肌细胞肥大的Ca~(2+)信号-转录偶联机制初步探讨
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