土拉弗朗西斯氏菌、炭疽芽孢杆菌定量PCR检测技术的研究

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土拉弗朗西斯氏菌、炭疽芽孢杆菌定量PCR检测技术的研究

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毕业论文范文题目：土拉弗朗西斯氏菌、炭疽芽孢杆菌定量PCR检测技术的研究，论文范文关键词：土拉弗朗西斯氏菌、炭疽芽孢杆菌定量PCR检测技术的研究
土拉弗朗西斯氏菌、炭疽芽孢杆菌定量PCR检测技术的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的:土拉弗朗西斯氏菌(Francisellatularensis,FT)和炭疽芽孢杆菌(Bacillusanthracis,BA)具有高致病性,是重要的生物战剂和生物恐怖剂,给人类的健康构成了严重威胁,因此有必要建立一种快速、可靠的检测这两种细菌的方法。方法:本研究基于TaqMan荧光探针定量PCR技术,建立并优化定量PCR检测体系,针对特异的染色体序列Aldo/ketoreductase醇醛酮还原酶基因(AKR基因)和外膜蛋白基因(fopA)设计引物及探针,检测土拉弗朗西斯氏菌;针对位于两个毒力相关质粒上的荚膜因子(capA)和致死因子基因(lef)以及染色体上的特异序列(GS)设计多对引物及探针,联合检测炭疽芽孢杆菌。选择基因组同源性高的菌种DNA作为模板,评（此处忽略..）价该检测体系的特异性;采用克隆株或减毒株以及强毒株基因组DNA作为模板,评价该检测体系的灵敏度。利用克隆株或减毒株污染环境土壤制备模拟样品,评价该检测体系在快速检测与现场检测等实际应用中的表现。分别采用重组质粒、克隆株或减毒株以及模拟污染水样本为模板,在上海消防特勤支队的进口消防多功能侦检车上,与进口荧光定量PCR试剂进行平行比对检测试验,评价该检测体系的准确率与检出率。结果:(1)优化筛选出土拉弗朗西斯氏菌染色体上的FT-AKR和FT-fopA片段作为检测靶序列,建立了TaqMan荧光定量PCR快速检测鉴定土拉弗朗西斯氏菌的反应体系及条件,以其他非土拉弗朗西斯氏菌菌种为模板未出现非特异扩增;检测克隆株质粒的灵敏度均为每个反应体系10拷贝;以土拉弗（文章此处忽略..）朗西斯氏菌基因组DNA作为模板的灵敏度试验,AKR-F/R引物对检测灵敏度可以达到0.25pg/μl;fopA-F/R引物对检测灵敏度是2.5pg/μl;用克隆株模拟环境土壤样本,两个引物对的检测灵敏度分别为440和960CFU/g土壤;盲测实验结果显示对于灵敏度范围内的阳性样本均能正确识别,并且能够正确检测出不同浓度的阳性样本。本检测体系与进口荧光定量PCR试剂对比检测试验结果显示:4份不同浓度的阳性样本与2份阴性样本均能正确识别;模拟6份污染水样本检出率100%,进口试剂阳性漏检1份。(2)优化筛选出炭疽芽孢杆菌基因组特异序列GS序列和pXO1质粒的lef基因、pXO2质粒的capA基因作为检测靶序列,建立了TaqMan荧光定量PCR快速检测鉴定炭疽芽孢杆菌的反应体系及条件,以其他（此处忽略..）非炭疽芽孢杆菌菌种为模板未出现非特异扩增;以BA-lef、BA-capA和BA-GS克隆株提取的质粒DNA作为模板,capA-F/R和GS-F/R引物对检测灵敏度为每个反应体系10拷贝,lef-F/R引物对为每个反应体系102拷贝;以炭疽芽孢杆菌Sterne菌株作为模板,lef-F/R和GS-F/R引物对检测灵敏度为1.2×10-2CFU/μl;以炭疽芽孢杆菌基因组DNA作为模板,lef-F/R引物对检测灵敏度可以达到2.4fg/μl;capA-F/R引物对检测灵敏度是24fg/μl;GS-F/R引物对检测灵敏度是0.24pg/μl;用炭疽芽孢杆菌Sterne菌株芽孢模拟环境土壤样本,lef-F/R和GS-F/R引物对的检测灵敏度可达2×103CFU/g土壤;盲测实验结果显示对于（略..）灵敏度范围内的阳性样本均能正确识别,并且能够正确检测出不同浓度的阳性样本。本检测体系与进口荧光定量PCR试剂对比检测试验结果显示:4份不同浓度的阳性样本与2份阴性样本均能正确识别;模拟6份污染水样本检出率100%,与进口试剂检出率持平。结论:本研究建立的土拉弗朗西斯氏菌和炭疽芽孢杆菌的检测鉴定体系,方法简便、快速,整个检测过程可在1h内完成,并且具有良好的特异性和灵敏度,与进口荧光定量PCR试剂比较准确率与检出率持平甚至略高,这为临床诊断、环境污染监测、防治生物突发事件等方面提供了快速检测鉴定的有力手段。

以上为本篇毕业论文范文土拉弗朗西斯氏菌、炭疽芽孢杆菌定量PCR检测技术的研究的介绍部分。

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