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作物内标准基因开发与应用研究

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毕业论文范文题目：作物内标准基因开发与应用研究，论文范文关键词：作物内标准基因开发与应用研究
作物内标准基因开发与应用研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：内标准基因是指具有物种特异性、拷贝数恒定、不显示等位基因变化的保守DNA序列。特定物种的内标准基因是区别其他物种的遗传标志,可用于物种及其产品鉴别、转基因成分检测等诸多领域。迄今为止,已经有许多物种开发出内标准基因,但是油棕、花生、向日葵、芝麻内标准基因的开发尚属空白。已开发的油菜和水稻内标准基因数量较多,但是缺乏深入比较研究,导致应用比较混乱。本研究针对目前农作物内标准基因研究现状和存在问题,设置了以下研究内容:1)油棕、花生、向日葵、芝麻内标准基因的开发;2)对已开发的油菜、水稻内标准基因进行比较研究。几种油料作物内标准基因的开发,是通过生物信息学分析,选取具有详细信息且同源序列少的DNA序列,利用PrimerPremier5.0软件设计引物和探针,建（本文此处忽略..）立相应的定性和定量PCR检测技术,并对候选基因的物种特异性、拷贝数情况、检测体系的检测灵敏度进行考察。内标准基因的比较研究,是对已报道的油菜、水稻内标准基因,及相应定性和定量PCR检测体系的适用性从物种特异性、拷贝数情况和检测灵敏度等方面进行分析评价。研究取得以下创新性结果:1、油棕以MT3-B为内标准基因,设计了引物Mt1、Mt2和探针Mtp,扩增片段为109bp。建立了相应的定性和定量PCR检测体系,并具有油棕特异性,检测灵敏度高,定性PCR可检测到低至5个拷贝的油棕基因组DNA,定量PCR的LOD和LOQ分别为5个和25个拷贝。建立的定量PCR标准曲线决定系数R2为0.998,PCR扩增效率为104%。利用建立的定性和定量PCR检测体系成功地从食用油中检测出棕榈油成份。2、花生以（此处忽略..）chi2.2为内标准基因,设计了引物chi2.2F、chi2.2R,扩增片段为81bp,建立的定性PCR检测体系具有花生特异性,检测灵敏度为16个拷贝。利用建立的PCR检测体系成功地从花生酱、花生饼干中检测出花生成份。3、向日葵以HaG5为内标准基因,设计了引物hagF和hagR和探针hagP,扩增片段为151bp。建立的定性和定量PCR检测体系具有向日葵特异性,定性PCR的检测灵敏度为16个拷贝。4、芝麻以SiMT为内标准基因,设计了引物SiMTF和SiMTR和探针SiMTP,扩增片段为153bp。建立的定性和定量PCR检测体系具有芝麻特异性,定性PCR的检测灵敏度为0.5ng芝麻基因组DNA。5、对油菜内标准基因的比较研究表明,目前已开发的油菜内标准基因BnAccg8、HMG-I/Y、Cr（此处忽略..）uA、FatA、PEP这5个基因均不能满足油菜内标准基因的要求。存在与萝卜、拟南芥等种外物种有交叉反应的情况,HMG-I/Y、CruA、PEP在油菜中存在着等位基因的变化,BnAccg8、HMG-I/Y的稳定性较差,在不同油菜品种中其Ct值波动较大。因此急需重新设计引物或开发新的合适的油菜内标准基因用于转基因油菜的检测,为转基因油菜的检测提供科学、准确、可靠的检测手段。6、对水稻内标准基因的比较研究表明,目前已开发的水稻内标准基因gos9、PLD、SPS、RBE这4个基因中,除PLD与高粱、甘蔗、土豆有交叉反应外,其他基因都具有较好的物种特异性,且均无等位基因的变化。在荧光定量PCR中,这4个基因在模板拷贝数和Ct值间具有良好的线性关系,表明其定量PCR体（文章此处忽略..）系适合用于样品的定量检测。gos9、PLD、SPS、RBE这4个基因的LOD分别为10个、3个、9个、9个拷贝的水稻基因组DNA,灵敏度高。因此水稻的gos9、SPS、RBE基因均适合作为水稻的内标准基因,用于转基因水稻的检测。本研究开发了油棕、花生、向日葵和芝麻的内标准基因,证明了这些基因的物种特异性、拷贝数和检测灵敏度,建立了这些基因的定性和定量检测方法。研究结果可以应用于油料作物及其加工产品的DNA鉴别,定性定量分析。本研究对油菜、水稻内标准基因的比较结果为转基因油菜、水稻的检测标准化提供了有力的技术支持和科学依据。

以上为本篇毕业论文范文作物内标准基因开发与应用研究的介绍部分。

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