大豆储藏蛋白基因Gy5的克隆及动物表白载体构建

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大豆储藏蛋白基因Gy5的克隆及动物表白载体构建

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毕业论文范文题目：大豆储藏蛋白基因Gy5的克隆及动物表白载体构建，论文范文关键词：大豆储藏蛋白基因Gy5的克隆及动物表白载体构建
大豆储藏蛋白基因Gy5的克隆及动物表白载体构建毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：近年来，跟着国民生活程度的进步以及对外贸易的开辟，作物养分品德研究日益引起人们的关注。利用基因工程技巧改进作物养分品德的研究始于20世纪90年代，虽起步较晚，但通过近10年的发展，现已获得了一些可喜的成绩。作物品德改进重要集中在改进种子储藏蛋白、淀粉、油脂的含量跟组成上。近年来国内外很多实验室竞相开展种子蛋白质基因工程研究。因为人类出产的动物蛋白重要来源于禾谷类跟豆类作物的种子，故种子蛋白质的改进极为重要。改变储藏蛋白质始终是禾谷类作物品德改进基因工程的研究课题。大豆种子储藏蛋白的含量远远高于其它作物，占种子干重的40％以上，是人类食品跟动物养殖的重要动物蛋白来源。大豆蛋白氨基酸组分齐全，特别是含有全部8种人体必须氨基酸，同时还存在抗肿（略..）瘤、防备心血管疾病、加强免疫功能等生理保健功能。存在极高的养分价值跟经济价值。大豆储藏蛋白中大部分是球蛋白，重要包含大豆球蛋白(11S球蛋白)跟β-伴大豆球蛋白(7S球蛋白)。11S球蛋白含硫氨基酸含量远高于7S蛋白，其含量比值(11S／7S)直接影响大豆蛋白养分品德及功能特点，从而影响大豆蛋白的利用价值。利用基因工程技巧，筛选精良的大豆蛋白11S球蛋白基因资源，将其转移到同种或异种动物中，以进步其种子蛋白质含量、改进蛋白质品德，这在作物品德改进方面存在广阔的利用前景，为特别蛋白质的出产开辟了道路。本研究根据Genebank发袁的大豆11S球蛋白Gy5的cDNA序列，利用DNAstar生物软件设计了一对引物。用经过改进的畀硫氰酸胍法提取大豆未成熟种子的总RN（略..）A。用RT-PCR法扩增出目标片段，用EcoRI／PstI酶切后与pUC19载体连接，重组质粒用热激法转化大肠杆菌。穿刺培养的菌株送交宝生物工程有限公司测序，测序成果表明所扩增的片段合乎预先设计，基因长度为1704bp，碱基正确率为99.6％。经氨基酸编码分析，有3个碱基为兼并予，其余3个碱基导致两个氨基酸有差别，氨基酸序列的同源性为99.6％。将此片段与存在CaMV35S启动子的表白载体pCAMBIA1301连接，构建了含有大豆储藏蛋白基因Gy5的动物表白载体。用反复冻融法将质粒载体转入根癌农杆菌LBA4404中，用共培养法将Gy5导入烟草叶片，在已获得的再生植株中，经抗性抉择跟PCR检测获得了转化植株。本研究克隆了一个精良种子储藏蛋白质基因，初步证明了所构建的动物转（此处忽略..）化载体可能将大豆种子储藏蛋白基因Gy5导入动物体并得到表白，为将其转移到同种或异种动物中，以进步其种子蛋白质含量跟改良种子蛋白质品德的深刻研究奠定了基本。吉林农业大学硕士论文大豆储藏蛋白基因Gys的克隆及动物表白载体构建此外，本研究对富含蛋白质、糖类等物质的组织或器官(如种子)的RNA提取方法进行了研究跟改进。用改进后的方法所提取的RNA样品，经紫外分光光度仪测定，0D260/280=1.9一2.0，OD260/23。2.0，RNA提取率达0.05mg/g;经甲醛变性琼脂糖凝胶电泳，可看到285跟185两条清楚的带，且前者带宽，阐明RNA不降解。此研究进步了RNA的提取效力跟品质，树破了一种高效提取RNA的方法。本研究还对RT一PCR的前提从逆转录体系中模板RNA的用量、PCR（本文此处忽略..）体系中引物浓度、退火温度等多少个方面进行了优化。断定在20ul逆转录体系中最佳模板RNA用量为1.sugPCR体系中最佳引物浓度为IPmol/ul;最佳退火温度为50℃。当用RT一PCR产物进行二次PCR时，可能是因为体系成分的改变，在退火温度为50℃时呈现非特异带，所以对其退火温度又进行了摸索，最后断定为54℃，此时能扩增出专一的目标带。由此可能得出论断:在其它前提雷同时，用逆转录产物做PCR的退火温度低于惯例peR，比惯例pCR低4oC左右。

以上为本篇毕业论文范文大豆储藏蛋白基因Gy5的克隆及动物表白载体构建的介绍部分。

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