秦岭大熊猫IL-2基因的克隆、原核表白及表白产物的生物活性研究

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秦岭大熊猫IL-2基因的克隆、原核表白及表白产物的生物活性研究

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毕业论文范文题目：秦岭大熊猫IL-2基因的克隆、原核表白及表白产物的生物活性研究，论文范文关键词：秦岭大熊猫IL-2基因的克隆、原核表白及表白产物的生物活性研究
秦岭大熊猫IL-2基因的克隆、原核表白及表白产物的生物活性研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：大熊猫是我国珍稀的野活泼物,寰球仅存1600多只,尤其是秦岭种群大熊猫的数量据第3次野外普查报告总数仅有273左右。大熊猫人工繁育中,因疾病尤其感染病引起的大熊猫发育不良跟逝世亡是目前大熊猫繁育豢养中的重要问题之一,进步大熊猫免疫力无疑是进步大熊猫抗病力从而降落人工繁育豢养过程中逝世亡率的基本手段。进步大熊猫免疫力首先要解决的问题是弄清大熊猫免疫体系各成分的免疫特点,树破大熊猫免疫信息库。因为大熊猫数量限度等因素,这一工作进展较（本文此处忽略..）为迟缓,大熊猫GenBank中的数据亟待充实,尤其是秦岭种群大熊猫的免疫材料还是空白。鉴于IL-2不仅在免疫体系中是一个非常关键的细胞因子,并且在临床疾病防备跟医治中的重要作用已经充分的证明,咱们发展本研究克隆了秦岭大熊猫IL-2基因并树破了原核表白体系表白出存在生物活性的秦岭大熊猫IL-2蛋白。根据GenBank上发表的大熊猫白细胞介素-2序列(GenbankaccessionDQ85233)设计2对特异性引物,在引物的高低游引物分辨（略..）带有BamH错误!未找到引用源。、HindⅢ酶切位点。通过RT-PCR从ConA引诱培养的成年秦岭大熊猫外周血淋巴细胞总RNA中扩增得到约468bp的大熊猫IL-2基因,并将其克隆到pGEM-T载体中,构建克隆质粒pGEM-T-IL-2。用雷同的限度性内切酶酶切阳性质粒pGEM-T-IL-2跟表白载体pET32a后构建重组表白载体,转化宿主菌BL21(DE3),经酶切及PCR鉴定筛选出阳性克隆,测序证明目标基因以正确的浏览框插入了表白载体,（本文此处忽略..）用不同浓度的IPTG引诱表白IL-2蛋白重要抗原区基因,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,原核表白产物大小约为32ku。经过对表白前提的优化,最后断定以37℃培养至OD600达0.6左右,参加IPTG至终浓度为0.3mmol/L,再以25℃持续培养12h,这样的培养前提下表白量最大,经分析表白蛋白量约占菌体蛋白的30%。表白产物经Western-blot分析,检测确认表白产物为带6个组氨酸标签的融合大熊猫IL-2。目标蛋白经大量引诱表白,可溶性实验证明重（略..）组蛋白以可溶性格势存在于引诱菌液上清中,本实验用镍柱亲跟层析法从上清中纯化了目标蛋白。用纯化的重组蛋白进行兔多克隆抗体系备跟体外活性检测,用ELISA检测兔血中的多克隆抗体,成果为阳性,表白产物存在良好的抗原性。MTT法进行重组蛋白的体外活性检测,成果表明重组蛋白存在促进淋巴细胞转化增殖的生物学活性。

以上为本篇毕业论文范文秦岭大熊猫IL-2基因的克隆、原核表白及表白产物的生物活性研究的介绍部分。

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