南阳牛BoLA-DRA基因克隆、序列分析及表白

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南阳牛BoLA-DRA基因克隆、序列分析及表白

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毕业论文范文题目：南阳牛BoLA-DRA基因克隆、序列分析及表白，论文范文关键词：南阳牛BoLA-DRA基因克隆、序列分析及表白
南阳牛BoLA-DRA基因克隆、序列分析及表白毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：牛病的防备跟把持对养牛业健康发展至关重要,牛病尤其是感染病的产生与其机体本身免疫功能状况有着密切的关联。古代免疫学研究表明,机体免疫功能程度的高低与个体遗传基因型之间存在因果关联。换言之,个体免疫功能受遗传基因把持。决定个体免疫功能的基因被统称为重要组织相容性复合体(majorhistocompatibilitycomplex,MHC),因为MHC与疾病产生密切相干,因此对MHC的研究颇受关注。目前对人跟小鼠的MHC基因组成已经基本阐明,但对于动物尤其是重要经济养殖动物的MHC基本组成还很不明白,这必定影响动物疾病（略..）防治跟遗传育种范畴的发展。因此,发展动物MHC组成分析研究意思重大。本文利用分子生物学技巧跟生物信息学相结合的方法,以南阳牛BoLA-DRA基因为研究对象,通过RT-PCR方法克隆了南阳牛BoLA-DRA基因,构建了原核跟真核表白载体,在原核跟真核中进行了表白,获得了以下成果:(1)通过RT-PCR方法从南阳牛脾脏组织中扩增BoLA-DRA基因的编码区,分别纯化PCR产物,连接到pGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆pGEM-DRA,并对其进行酶切鉴定跟序列测定。成果表明,所克隆的BoLA-DRA基因为775b（文章此处忽略..）p,与GenBank中报道的牛的BoLA-DRA核苷酸序列同源性为99%,推导的氨基酸同源性为83%。与羊、马、野猪跟人4个物种也进行核苷酸序列同源性比较,成果显示,其同源性与羊的为96%、马的为86%、野猪的为85%、人的为84%,推导的氨基酸同源性分辨为82%、83%、83%、83%。信号肽软件分析表明南阳牛BoLA-DRA编码253个氨基酸残基的多肽链,前24个氨基酸为信号肽序列,后面为成熟肽序列。(2)利用限度性内切酶XhoI/BamHI分辨对测序正确的重组T载体质粒跟原核表白载体质粒PGEX-4T-1进行双酶切,经过T4连接酶链接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感触态细胞中,构建原核表白载体（文章此处忽略..）。经鉴定,重组子中含有目标基因。IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)引诱重组基因在大肠杆菌中表白,SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分析,成果显示,OD值为0.4,IPTG浓度为1mmol/L,时光为4h时,重组蛋白表白量较高,融合蛋白表白分子品质约为54.4ku,与预期大小一致。Westernblot分析也证明,融合蛋白保存了GST标记的抗原性,证明该基因能在大肠杆菌中表白。(3)用上述同样的双酶切方法将克隆的目标片段连接到真核表白载体pEGFP-C1上,筛选阳性克隆后,提取重组质粒,酶切跟测序鉴定表明成功构建了真核表白载体。脂质（本文此处忽略..）体介导转染牛成纤维细胞,通过G418筛选阳性细胞,倒置显微镜下察看成果显示绿色荧光均匀的分布于全部靶细胞。RT-PCR检测表明目标基因在牛成纤维细胞中表白出了mRNA。综上所述,本研究成功克隆了南阳牛BoLA-DRA基因,得到了BoLA-DRA基因的原核表白产物,并证明该基因在牛成纤维细胞中表白出了mRNA。本研究成果为南阳牛BoLA-DRA基因的功能研究奠定了基本。

以上为本篇毕业论文范文南阳牛BoLA-DRA基因克隆、序列分析及表白的介绍部分。

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