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姜黄素对匹罗卡品致痫鼠海马神经元保护作用的研究

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毕业论文范文题目:姜黄素对匹罗卡品致痫鼠海马神经元保护作用的研究,论文范文关键词:姜黄素对匹罗卡品致痫鼠海马神经元保护作用的研究
姜黄素对匹罗卡品致痫鼠海马神经元保护作用的研究毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:目标癫痫是人类常见的脑伤害性疾病,约有40%的人类癫痫来源于人脑颞叶故称为颞叶癫痫。颞叶癫痫重要以海马病变为主,这可能与海马构造独特的神经元环路及纤维接洽有关。这种颞叶癫痫的持续状况会导致神经元跟星形胶质细胞中谷氨酸浓度的病感性升高,而这种高兴性氨基酸的程度升高会介导跟加强氧化应激反应。在神经体系中海马神经元比其它区域的神经元抵抗这种氧化应激反应伤害的才能要弱得多,因此海马神经元成为颞叶癫痫模型中最敏感的部位,故颞叶癫痫患者常伴有海马神经元的伤害甚至丧失。研究表明癫痫72小时后引起海马神经元的丧失重要以细胞凋亡为主。姜黄素是一种从姜科动物Curcumalonga的根茎姜黄中提取的一种动物多酚,有抗氧化、抗炎、抗凝、抗肿瘤、抗渐变等多方面的药理作用。有文献报道对海人酸引诱癫痫的实验动物提前打针姜黄素,能减轻海人酸引诱癫痫所造成的海马神经元的伤害程度,从而减轻海马神经元的逝世亡。本实验的目标是研究姜黄素对匹罗卡品癫痫模型小鼠海马神经元凋亡的影响。材料与方法一、实验分组CD-1小鼠,雌雄并用,共32只,体重18-22g,随机分为4组,每组8只。1、第一组为对比组(Ctl)2、第二组为锂-匹罗卡品引诱癫痫组(Pil)3、第三组为提前18小时预注姜黄素的癫痫组(Cur+Pil)4、第四组为单纯打针姜黄素动物组(Cur)二、癫痫行动学察看CD-1小鼠腹腔打针锂-匹罗卡品引诱癫痫,成模后察看其行动学变更(此处忽略..),参考Simialowski6级(0-Ⅴ)评定法。三、组织切片的制备成模鼠于锂-匹罗卡品引诱癫痫72小时后腹腔打针4%戊巴比妥钠麻醉动物,而后用蠕动泵经左心室灌流,取大脑,部分标本置于30%蔗糖液4℃冰箱保存过夜,制备10μm的冰冻切片,部分标本惯例制成7μm的石蜡切片。10μm冰冻切片做甲酚紫染色,7μm的石蜡切片做TUNEL染色,凋亡因子Caspase-3跟Caspase-9原位杂交的检测。四、染色1、甲酚紫染色法10μm的冰冻切片采取甲酚紫染色法染色。切片空气中晾干后惯例染色10分钟,冲刷后酒精梯度脱水,透明,封固,镜下察看。2、TUNEL染色TUNEL染色采取的是试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司),严格按照阐明书操作,切片经惯例脱蜡,胃蛋白酶消化,滴加反应液20μl,而后滴加反应终止液,抗地高辛过氧化物酶抗体,最后DAB显色,封片镜下察看。3、凋亡因子的检测凋亡因子Caspase-3跟Caspase-9的检测采取试剂盒,按照阐明惯例脱蜡至水,灭活内源性过氧化物酶,胃蛋白酶消化而后PBS冲刷,经过预杂交,杂交后洗,SABC37℃20分钟,生物素过氧化物酶室温30分钟,冲刷后DAB显色。成果一、行动学察看成果提前18小时打针姜黄素后引诱癫痫的实验动物组(Cur+Pil)跟癫痫动物组(Pil)动物在引诱癫痫72小时后,均呈现典范的癫痫大发生Ⅳ级-Ⅴ级不等并有部分动物呈现癫痫持续状况甚至自发性癫痫,而在对比组(Ctl)跟单纯打(此处忽略..)针姜黄素组(Cur)不产生癫痫。二、姜黄素对癫痫动物海马神经元的保护作用1、甲酚紫染色检测姜黄素对癫痫动物海马神经元的保护作用在甲酚紫染色的切片上,匹罗卡品致痫组(Pil)动物在引诱癫痫72小时后海马的CA1区跟CA3区呈现明显的锥体神经元逝世亡,而经过提前18小时预注姜黄素的癫痫组(Cur+Pil)动物在引诱癫痫72小时后海马锥体神经元逝世亡数量减少,提示姜黄素对海马神经元有明显的保护作用,有效的克制了海马神经元的逝世亡。2、TUNEL染色检测姜黄素对癫痫动物海马神经元的保护作用TUNEL染色的成果与甲酚紫染色成果趋势基本一致,有大量的TUNEL阳性细胞呈当初匹罗卡品致痫组(Pil)动物的海马CA1区跟CA3区,而经过提前18小时预注姜黄素的癫痫组动物(Cur+Pil)的海马神经元中TUNEL阳性细胞明显减少,表明姜黄素可能使癫痫鼠的海马神经元凋亡数量减少,起到了对神经元的保护作用。3、凋亡因子检测姜黄素对癫痫动物海马神经元的保护作用用原位杂交技巧分析凋亡因子Caspase-3跟Caspase-9在各组动物海马神经元的表白,发明在匹罗卡品致痫组(Pil)动物的海马CA1区跟CA3区中Caspase-3跟Caspase-9阳性细胞明显增多,而在经过姜黄素打针的癫痫组(Cur+Pil)动物海马神经元中阳性细胞减少,从凋亡因子的角度阐明姜黄素能有效的克制凋亡因子跟凋亡的产生,揭示了姜黄素克制凋亡产生的道路(文章此处忽略..)。探讨动物实验表明频繁癫痫发生可导致脑神经元的抉择性伤害跟丧失,反复痫性发生72小时后可造成脑组织缺血、缺氧,使活性氧自由基、NO等大量产生,其所引诱的细胞逝世亡从生物化学跟状况学上都存在细胞凋亡的特点,因此揣测细胞凋亡是癫痫患者大脑神经元逝世亡的一种重要方法。癫痫最常见的受损神经元是海马CA1跟CA3区的锥体细胞。已知的细胞凋亡有两条道路:一是TNF受体家族成员参加的通过caspase-8活化的外源性凋亡道路;二是细胞色素C参加的通过caspase-9活化的内源性凋亡。两条道路最后均通过激活下游的效应因子caspase-3,7引诱细胞产生凋亡。从本研究的成果可能看出在匹罗卡品引诱癫痫组动物的海马中,甲酚紫染色的CA1区跟CA3区的存活细胞较少,证明了癫痫可能导致细胞的丧失或逝世亡,而为了进一步证明这种癫痫72小时后的细胞丧失或逝世亡属于凋亡,咱们做了TUNEL检测,证明了癫痫72小时后的细胞丧失或逝世亡属于细胞凋亡。在进一步的实验中,为了探讨这种凋亡产生的道路,咱们检测了凋亡因子caspase-3,9,成果表明癫痫组动物的海马CA1区跟CA3区凋亡因子阳性反应细胞较明显数量较多,进一步提示了这种癫痫引起的变更可能是一种内源性道路的细胞凋亡。姜黄素存在抗氧化、抗炎、抗凝、抗肿瘤、抗渐变等多方面的药理作用,咱们对癫痫组动物预注姜黄素,并比较分析了TUNEL的检测及内源性(文章此处忽略..)凋亡道路中caspase-3跟caspase-9凋亡因子的检测成果,发明在预注姜黄素后引诱癫痫组的动物海马中其存活细胞数量增多,并且凋亡因子caspase-3跟caspase-9中的阳性细胞数量比癫痫组有所减少,证明姜黄素对内源性凋亡道路起到了克制的作用,有效的克制了凋亡的产生,对癫痫所致的海马神经元逝世亡及丧失起到了保护作用。本研究为姜黄素对癫痫的防备跟医治提供了状况学根据。论断本研究通过腹腔打针姜黄素的方法采取TUNEL技巧、原位杂交等实验技巧察看了给于不同处理因素的CD-1小鼠脑内海马神经元的变更及其之间的彼此关联,提示:1、小鼠在腹腔打针匹罗卡品后岂但其行动学产生变更而且在甲酚紫跟TUNEL染色中动物的海马的CA1区跟CA3区呈现明显的锥体神经元逝世亡,姜黄素可能使癫痫鼠的海马神经元逝世亡数量减少,起到了对神经元的保护作用。2、姜黄素可能使癫痫动物海马神经元内的凋亡因子阳性细胞减少,从凋亡因子跟凋亡道路的角度,进一步提示姜黄素能有效地克制凋亡因子跟凋亡的产生。


以上为本篇毕业论文范文姜黄素对匹罗卡品致痫鼠海马神经元保护作用的研究的介绍部分。
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