糖原合成酶激酶-3β在高胰岛素作用下对纤连蛋白表白的影响

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糖原合成酶激酶-3β在高胰岛素作用下对纤连蛋白表白的影响

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毕业论文范文题目：糖原合成酶激酶-3β在高胰岛素作用下对纤连蛋白表白的影响，论文范文关键词：糖原合成酶激酶-3β在高胰岛素作用下对纤连蛋白表白的影响
糖原合成酶激酶-3β在高胰岛素作用下对纤连蛋白表白的影响毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：糖尿病肾病(DiabeticNephropathy,DN)是糖尿病较重大的合并症,是终末期肾病的重要起因。糖尿病肾病以肾小球基底膜增厚及细胞外基质积聚为重要病理表示。系膜细胞是肾小球病变的重要靶细胞之一,其增殖、分化在肾小球疾病的进展演变中起着主导作用。在糖尿病肾病中,系膜细胞是受高血糖、高胰岛素影响较为明显的细胞。肾小球系膜病变是糖尿病肾病的病理所见的最凸起改变之一。这种改变在DN其它基本病理改变,如肾小球肥大、细胞外基质产生增多跟肾小球硬化的产生发展过程中存在重要的病理意思,然而导致这些改变产生确切切机制目前尚不完全明白。固然有研究发明,高糖刺激能导致系膜细胞肥大跟细胞外基质(ECM)合成增多,但仍不足以用其来全面阐明有关的发病机理。2型糖尿病时,咱们发明肝脏及肌肉组织中GSK-3β活性异样升高（本文此处忽略..）,GSK-3β广泛存在于各种细胞中,参加多种细胞的分化、增殖跟凋亡等重要生理过程。在糖尿病时其减弱了胰岛素信号的传导,使糖的利用、糖原合成等过程受克制,从而呈现胰岛素抵抗。而高胰岛素血症作用于肾脏部分则可能通过进步GSK-3β活性而促进细胞外基质积聚,从而导致或加重了DN的产生及发展。目标:本次实验体外培养肾小球系膜细胞,待系膜细胞融合至80%-90%时,同步化后利用Lipofectamine2000转染试剂(Invitrogen)将GSK-3βsiRNA短片段转染到系膜细胞中,荧光显微镜下察看,24~48小时后收集细胞,通过Real-timePCR检测转染后的系膜细胞纤连蛋白的表白程度,分析GSK-3β在高胰岛素作用下的变更。阐明GSK-3β在DN时胰岛素信号道路中的作用,在高胰岛素血症中GSK-3β活性对细胞外基质积聚的影响,（本文此处忽略..）为防治DN提供实际根据,并为研发防备DN的产生及延缓DN的进展的新药提供实际基本跟实验根据。方法:本次实验体外培养肾小球系膜细胞,胰酶消化传代,转入24孔板中持续培养,待系膜细胞融合至80%-90%时,用DMEM同步化处理24小时。分成9组:a、生理盐水对比组b、单纯高胰岛素组i、阴性转染对比组c、生理盐水+siRNA(6331)组d、生理盐水+siRNA(6057)组e、生理盐水+siRNA(6058)组。f、高胰岛素+siRNA(6331)组g、高胰岛素+siRNA(6057)组h、高胰岛素+siRNA(6058)组。用50μLDMEM稀释siRNA,微微吹吸3-5次混匀。微微倒置混匀转染试剂,用50μLDMEM稀释1.0μLLipofectamineTM2000,微微吹吸3-5次混匀,室温下静置5min。混淆转染试剂跟siRNA稀释液,微微吹吸3-5次混匀,室温下静置20min。转染复合物参加到24孔细胞板中,100μL（文章此处忽略..）/孔,前后轻摇细胞板混淆均匀。细胞板置于37℃、5%CO2培养箱中培养24-48hrs。荧光显微镜下察看并拍照。24~48小时后收集细胞,离心后去上清,提取RNA(所有总RNA的提取步骤按照QIAGEN的RNeasy@MiniKit试剂盒阐明书),通过Real-timePCR检测转各组系膜细胞纤连蛋白的表白程度,分析GSK-3β在高胰岛素作用下的变更。成果:荧光标记的siRNA转染入系膜细胞24h后,用荧光显微镜察看,可见部分转染效力可达40-60%,细胞密度稍大的区域转染效力可达80%。收集细胞后提取RNA进行RealtimePCR检测纤连蛋白在各组的表白程度。检测成果显示在高胰岛素作用下纤连蛋白表白明显高于生理盐水对比组,沉默GSK-3β后,纤连蛋白表白明显升高,而高胰岛素刺激组的纤连蛋白表白程度更高。论断:1.成功转染肾小球系膜细胞是本实（文章此处忽略..）验的关键,荧光显微镜下察看转染效力较幻想。2.RealtimePCR检测成果阐明高胰岛素对肾小球细胞外基质分泌增多存在促进作用,GSK-3β作为其负调节因子,对其有必定的调节作用,在GSK-3βsiRNA短片段转染系膜细胞后,其对高胰岛素刺激导致的细胞外基质分泌凑集的克制造用明显减弱。3.在高胰岛素血症中GSK-3β活性对细胞外基质积聚的影响,为防治DN提供实际根据,并为研发防备DN的产生及延缓DN的进展的新药提供实际基本跟实验根据。

以上为本篇毕业论文范文糖原合成酶激酶-3β在高胰岛素作用下对纤连蛋白表白的影响的介绍部分。

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