血吸虫虫卵蛋白IPSE基因合成、表白及功能分析

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血吸虫虫卵蛋白IPSE基因合成、表白及功能分析

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毕业论文范文题目：血吸虫虫卵蛋白IPSE基因合成、表白及功能分析，论文范文关键词：血吸虫虫卵蛋白IPSE基因合成、表白及功能分析
血吸虫虫卵蛋白IPSE基因合成、表白及功能分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：血吸虫病是一种迫害人类健康的重要的处所性感染病。血吸虫之所以能长期寄生于人体内,重要的起因是血吸虫成虫跟虫卵的排泄分泌抗原可能引诱宿主的免疫体系产生免疫反应类型的偏移,由感染初期的存在抗血吸虫感染功能的Th1型保护性免疫反应改变为有利于血吸虫成长发育的Th2型免疫反应。血吸虫排泄分泌抗本来源于血吸虫虫体或虫卵,与宿主免疫体系直接接触,是活体血吸虫存在于宿主体内的直接证据,检测这些虫源性分子或针对这些分子的特异性抗体存在重要的诊断意思。同时,研究这些分子的功能也将有助于阐明血吸虫感染免疫机制,对发展高效疫苗,免疫佐剂以及发展本身免疫性疾病的防备办法同样存在重要的促进（文章此处忽略..）作用。已有的研究表明曼氏血吸虫的虫卵蛋白IPSE(IL4-inducingprincipleofS.mansonieggs)分子在虫卵中含量丰富,是一种外分泌糖蛋白。以此抗原检测血吸虫病血清抗体,表示出高度的特异性跟敏感性,存在较高的诊断价值跟必定的疗效考察价值。同时该分子还是一种有效的免疫调节剂,能促进IL-4程度升高,加强Th2型免疫应答。对日本IPSE样分子的研究尚未见报道,本研究根据曼氏血吸虫的IPSE基因DNA序列,人工合成IPSE基因,制备了存在天然功能活性的重组IPSE蛋白,为将来采取cDNA文库筛选的方法发明日本血吸虫IPSE样蛋白分子基因,发展新的血吸（略..）虫病诊断方法、免疫干涉办法提供了前提。本研究包含如下三个部分内容:1.曼氏血吸虫虫卵IPSE基因合成与鉴定根据编码IPSE成熟肽基因的核苷酸序列设计14条末端互补的寡核苷酸片段(每条长50bp),并进行化学合成。以此14条寡核苷酸片段为引物进行OverlappingPCR,获得长度为417bp的IPSEDNA片段。将合成的DNA片段插入到TA克隆载体pGEM-T中掉队行DNA序列分析。测序成果显示合成的IPSE序列与天然基因序列完全一致,表明本研究的曼氏血吸虫虫卵IPSE基因合成获得成功。2.IPSE基因的原核表白质粒的构建及融合蛋白的表白将IPSEDNA片段定向克隆到表白载体pET32a（略..）(+)的硫氧还蛋白(Trx)序列下游,构建重组表白质粒IPSE/pET32a(+)。重组质粒IPSE/pET32a(+)转化进表白宿主菌E.coliBL21(DE3)中获得含此重组质粒的转化子菌株。经IPTG引诱,SDS-PAGE分析,转化子细菌能表白分子量约35.7kDa的蛋白分子,与预计Trx-IPSE融合蛋白分子量大小相符。3.Trx-IPSE融合蛋白纯化、复性与功能研究大量制备表白产物,用镍螯合亲跟层析胶在变性前提对该重组融合蛋白进行纯化,获得纯化重组Trx-IPSE融合蛋白。用大量PBS对变性融合蛋白进行透析,获得部分复性的可溶性重组Trx-IPSE融合蛋白。免疫印渍分析表明,无论变性还是复（本文此处忽略..）性的Trx-IPSE融合蛋白均可能被抗血吸虫天然IPSE蛋白的IgG抗体所辨认;以羊抗人IgE为二抗,显示融合蛋白Trx-IPSE能与健康人血清中IgE抗体非特异性结合,阐明重组表白的IPSE蛋白同样存在与IgE抗体结合的才能。本研究成功地合成了曼氏血吸虫虫卵IPSE蛋白基因,获得了存在与天然蛋白功能类似的重组IPSE蛋白,为下一步利用抗曼氏血吸虫IPSE蛋白抗体筛选日本血吸虫虫卵cDNA文库,发明日本血吸虫类似基因,发展新的血吸虫病诊断方法及免疫干涉办法奠定了基本。

以上为本篇毕业论文范文血吸虫虫卵蛋白IPSE基因合成、表白及功能分析的介绍部分。

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