斑点叉尾鮰α干扰素基因在毕赤酵母中的表达

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斑点叉尾鮰α干扰素基因在毕赤酵母中的表达

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毕业论文范文题目：斑点叉尾鮰α干扰素基因在毕赤酵母中的表达，论文范文关键词：斑点叉尾鮰α干扰素基因在毕赤酵母中的表达
斑点叉尾鮰α干扰素基因在毕赤酵母中的表达毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：为有效防制因斑点叉尾鮰病毒等病毒性疾病引起的感染性疾病,本研究利用毕赤酵母表达系统对斑点叉尾鮰α干扰素基因(IFN-α)进行了表达和活性检测。本实验根据斑点叉尾鮰IFN-α的核苷酸序列(EU783919)以及该基因的酶切图谱和表达载体多克隆位点的分析,设计并合成一对引物P1、P2,在上游引物P1中加入XhoⅠ限制性内切酶酶切位（此处忽略..）点,在下游引物P2中加入NotⅠ限制性内切酶酶切位点。从原核重组表达质粒中扩增斑点叉尾鮰IFN-α完整的开放阅读框(ORF),扩增长度为492bp。目的片段与表达载体pPICZαA都经过XhoⅠ/NotⅠ双酶切后,连接转化大肠杆菌DH5α,得到真核重组表达质粒pPICZα-IFN-α,并送Invitrogen公司测（本文此处忽略..）序鉴定,确定目的基因完整ORF已经正确插入真核表达载体pPICZαA。重组表达质粒pPICZαA-IFN-α通过SacⅠ单酶切、电泳,纯化回收酶切产物。电转化感受态的毕赤酵母工程菌X33,转化后涂布含Zeocin培养基,于28℃培养4-5d,获得多个单菌落,筛选具有高抗性的转化子。先用BMGY培养基(含甘油)激活培养（略..）约24h,OD_(260)值达2.7和3.4时,收集菌液,250r/min诱导表达。每24h添加一次甲醇,保持甲醇终浓度为1%,进行诱导表达。诱导表达后,在不同时间阶段收集菌液,离心、取上清。将不同时间段收集的上清液进行SDS-PAGE电泳分析,可发现有清晰的蛋白条带。将上述甲醇诱导表达后的上清液,进行无菌检验并稀释成不同浓度,利用细胞（本文此处忽略..）攻毒后的病变,初步判断干扰素的生物活性。结果显示本研究成功在毕赤酵母中表达出斑点叉尾鮰IFN-α,该表达蛋白能够干扰VSV病毒在CCO上的作用,表明该蛋白在预防和治疗斑点叉尾鮰病毒性疾病方面有潜在的应用价值。

以上为本篇毕业论文范文斑点叉尾鮰α干扰素基因在毕赤酵母中的表达的介绍部分。

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