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草鱼MDA5基因和LGP2基因的克隆与表达

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毕业论文范文题目：草鱼MDA5基因和LGP2基因的克隆与表达，论文范文关键词：草鱼MDA5基因和LGP2基因的克隆与表达
草鱼MDA5基因和LGP2基因的克隆与表达毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：草鱼(Ctenopharyngodonidella)是我国重要的淡水经济鱼类,养殖规模居“四大家鱼”之首。在具有生长快、肉质好、养殖成本低等优点的同时,草鱼对多种病害的抵御能力较弱是养殖过程中面临的棘手问题之一,每年因病害造成的损失高达数十亿元。由草鱼呼肠孤病毒(Grasscarpreovirus,GCRV)引起的草鱼出血病是主要病害之一。目前尚无特别有效的药物和方法针对该病毒,而草鱼自身特异性免疫能力不发达在某种程度上导致了疫苗使用效果不佳,因而从先天性免疫途径入手寻找抗GCRV的关键分子为今后草鱼抗病育种奠定基础。在漫长的物种进化过程中多细胞动物保留了许多相似的抗病毒先天性免疫途径,其中以TLR(Toll-likereceptors)和RLR(RIG-I-likereceptors)等模式识别家族途径为代表。RLR家族途径是哺乳动物中新近发现的重要的抗病毒途径之一,该家族包括3个（文章此处忽略..）成员:RIG-I(Retinoicacid-induciblegene-I)、MDA5(Melanoma-differentiation-associatedgene5)和LGP2(Laboratoryofgeneticsandphysiology2),它们各自识别不同类型的胞内病毒核酸分子,并最终激发宿主产生一系列的抗病毒反应,因此阐明鱼类RLR家族在抗病毒过程中的作用具有重要意义。本研究根据基因序列同源比对的结果设计简并引物扩增部分片段,结合cDNA末端快速扩增、半定量RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR及生物信息学分析等技术,克隆了草鱼MDA5(CiMDA5)和LGP2(CiLGP2)基因,并就其进化关系以及在抗GCRV中发挥的作用进行了相关探索,取得了如下结果:(1)CiMDA5基因的克隆与表达胞浆解旋酶MDA5(黑色素瘤分化相关基因5)识别长的双链RNA病毒分子和5'磷酸基团的单链RNA,并介导I型干扰素的（此处忽略..）分泌。本研究首次从鱼类中克隆到MDA5基因,并通过研究CiMDA5基因的表达模式揭示其功能。CiMDA5基因的cDNA全长由3233个核苷酸构成,编码含961个氨基酸的蛋白。预测的氨基酸序列主要包括6个结构域:1个CARD(Caspaseactivationandrecruitmentdomain)、1个DEXDc(DEAD/DEAHboxhelicasedomain)、1个ResIII(ConservedrestrictiondomainofbacterialtypeIIIrestrictionenzyme)、2个HELICc(Helicasesuperfamilyc-terminaldomain)和1个RD(Regulatorydomain)调控区。CiMDA5基因的mRNA在所有被检组织中均有表达。半定量RT-PCR结果表明CiMDA5基因在正常个体的脾脏、皮肤和鳃的表达量较高,注射GCRV后表达量上调。脾脏中12h的（本文此处忽略..）表达量显著上升(1.80倍,P0.05),24h达到峰值(7.48倍,P0.05),注射后48h恢复到正常水平(P0.05)。肝脏中48h的表达量显著上升(5.00倍,P0.05),注射后72h恢复到正常水平(P0.05)。(2)CiLGP2基因的克隆与表达LGP2与RIG-I和MDA5同源,但缺少CARD结构域。本研究从草鱼中克隆了LGP2基因并对其表达规律进行了研究。CiLGP2基因的cDNA有2920个核苷酸,含5个ATTTA不稳定模体。CiLGP2基因的开放阅读框有2043个核苷酸,编码含680个氨基酸的蛋白,该预测蛋白包括5个主要重叠结构域:2个DEXDc、1个ResIII、1个HELICc以及1个RD调控区。通过同源建模,发现CiLGP2蛋白的RD调控区比人类的LGP2多一个α-helix结构。半定量RT-PCR结果表明CiLGP2基因的mRNA在各组织中均有表达,脾脏、皮肤、心脏和肠的表达量较高,注射GCRV后表达量上调。脾脏中12h的表达量显著上升(14.50倍,P0.05),24h达到峰值(19.00倍,P0.05),48h后稍有下降（本文此处忽略..）(10.40倍)并在后期维持该水平(P0.05)。肝脏中24h表达量显著上升(3.80倍,P0.05),48h达到峰值(10.70倍,P0.05),72h下降(5.80倍,P0.05)并在后期维持高表达(P0.05)。以上试验结果提示CiMDA5和CiLGP2基因的表达和草鱼抗病毒先天性免疫存在一定的联系,为进一步研究鱼类RLR信号途径奠定了基础。深入了解这两个重要的胞浆病毒识别受体将有助于寻找新的有效手段来预防和控制水产病毒性疾病的感染。

以上为本篇毕业论文范文草鱼MDA5基因和LGP2基因的克隆与表达的介绍部分。

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