大豆CHS8、CHIⅡ、SAI融合基因的原核表达及植物表达载体构建与转化

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大豆CHS8、CHIⅡ、SAI融合基因的原核表达及植物表达载体构建与转化

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毕业论文范文题目：大豆CHS8、CHIⅡ、SAI融合基因的原核表达及植物表达载体构建与转化，论文范文关键词：大豆CHS8、CHIⅡ、SAI融合基因的原核表达及植物表达载体构建与转化
大豆CHS8、CHIⅡ、SAI融合基因的原核表达及植物表达载体构建与转化毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：大豆异黄酮是大豆新陈代谢中的一种重要次生代谢产物,它对人体的健康有着非常重要的影响,在骨质疏松症、心血管疾病以及癌症等方面的预防和治疗中有着重要的生物功效。大豆异黄酮的催化合成涉及到两种关键酶,它们分别是查尔酮合酶(CHS)、查尔酮异构酶(CHI)。通过基因工程的手段,转化单个关键酶基因提高异黄酮产量的效果并不是很理想,而分次转化多基因（文章此处忽略..）对于大豆遗传转化体系来说又是个难点。因此,多基因融合就成为一种行之有效的方法。在构建多基因融合载体时,连接肽的选择很重要。因为融合蛋白可能会影响彼此的表达或者折叠,2A连接肽是口蹄疫病毒的一段多肽,它在真核细胞中表达时会发生自剪切作用,融合蛋白会分开成两个单独的蛋白,这样既可以达到两个基因融合利于转化的目的,又能在植物体内自剪切分（此处忽略..）开而行使各自的功能。但迄今为止,在农作物中2A肽的成功使用仅限于玉米,如果这种多基因融合转化的方法可以在大豆等双子叶植物中使用,对提高大豆品质基因的表达将会起到很大的促进作用。本研究克隆了大豆异黄酮生物合成途径中的CHS8和CHIⅡ,同时利用SOE-PCR技术扩增得到了含有2A肽的CHS和CHI的融合基因,命名为SAI,以及含有GGS（此处忽略..）S序列linker的融合基因,命名为SI。将这四个基因分别构建原核表达载体,在大肠杆菌中进行初步的表达分析,结果表明2A肽在原核中对蛋白的表达没有影响,也不能发生自剪切作用。进行上述实验的同时,构建CHS8、CHIⅡ、SAI以及SI四种基因的真核表达载体并将它们转化到农杆菌中,构建时在两个单独关键酶基因的前面加上KOZAK序列。后期（本文此处忽略..）利用农杆菌介导法转化大豆子叶节,首先对大豆基因型进行筛选,其次对侵染时的条件进行优化,包括所使用的农杆菌的生长时期,采用的侵染方式以及侵染时间,最后确定潮霉素的筛选浓度。利用优化的大豆子叶节转化体系,现在可以顺利的得到转基因抗性植株。上述工作为后续的理论研究以及得到高异黄酮含量的大豆新品种打下了坚实基础。

以上为本篇毕业论文范文大豆CHS8、CHIⅡ、SAI融合基因的原核表达及植物表达载体构建与转化的介绍部分。

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