H1亚型流感病毒通用疫苗的构建及免疫保护效力研究

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H1亚型流感病毒通用疫苗的构建及免疫保护效力研究

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毕业论文范文题目：H1亚型流感病毒通用疫苗的构建及免疫保护效力研究，论文范文关键词：H1亚型流感病毒通用疫苗的构建及免疫保护效力研究
H1亚型流感病毒通用疫苗的构建及免疫保护效力研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：猪流感(swineinfluenza,SI)是由隶属于正黏病毒科的猪流感病毒(swineinfluenzavirus,SIV)引起的猪急性高度传染性疾病。主要临床症状表现为体温升高、食欲不振、呼吸困难、咳嗽、流产以及延迟出栏等，是目前危害全世界养猪业的重要疫病之一。猪流感曾多次在世界上引起大的爆发和流行，其中最严重的一次是1918年西班牙大流感，全球近2100万人感染死亡。2009年墨西哥和北美爆发了甲型H1N1流感，其传染性很强，传播范围很广，再次突显了流感病毒对人类社会造成的巨大危害。目前预防流感发生与传播的最有效方式是疫苗接种，但是由于流感病毒亚型多，变异快，所以要定期更改疫苗株，这不仅消耗大量的人力和物力，并且还存在新疫苗研制滞后于病毒变异这一重大问题。因此，研制一种能够应对流感病毒快速变异，并具有广泛保护作用的“通用型”疫苗具有重要的应用价值。DNA疫苗因其能够（此处忽略..）同时诱导机体产生特异性的体液免疫应答和细胞免疫应答而受到了广泛的关注，基于HA基因的流感DNA疫苗也得到了一定的研究，但由于DNA疫苗存在转染效率不高，抗原表达量低的缺点，制约了其在流感通用疫苗研究中的发展。本研究首先探讨了密码子的优化对流感病毒HA基因DNA疫苗在小鼠体内免疫原性及保护效力的影响，进而研究了基于HA基因共有序列的H1亚型流感通用疫苗对异源流感病毒的保护效力，同时也对本实验室之前设计的M2e分支肽疫苗对异源流感病毒的保护效力进行了研究。1、密码子优化的流感病毒HA基因DNA疫苗在小鼠体内免疫保护效力研究。由于DNA疫苗存在转染效率不高，抗原表达量低的缺点，本实验通过密码子优化的方法提高病毒HA基因的免疫原性。将H1亚型猪流感病毒A/Swine/Guangdong/1/01(H1N1)和rPan09(HA和NA来自A/California/04/09,其余六（文章此处忽略..）个片段来自PR8的重组病毒)的HA基因密码子进行优化，连入pCAGGS真核表达载体中，获得pCA-opti-G11和pCA-opti-r09重组质粒。同时将野生型的A/Swine/Guangdong/1/01(H1N1)和rPan09的HA基因与载体pCAGGS相连接，得到pCA-G11和pCA-r09重组质粒，在小鼠体内验证免疫效果和攻毒保护效果。实验表明：HA基因密码子的优化不仅可显著提高DNA疫苗诱导的保护性体液免疫应答和细胞免疫应答的水平，还可有效抑制病毒在小鼠肺脏的复制同时减轻肺脏的病理学变化，能够提供较好的免疫保护。2、H1亚型流感病毒通用疫苗的免疫保护效力研究。HA是流感病毒最主要的表面抗原，它能够诱导机体产生相应的中和抗体，产生免疫保护作用。本研究从经典H1亚型流感病毒和甲型流感病毒的主要靶抗原HA基因入手，分析获得HA基因的共有序列，进行密码子优化后（optim（此处忽略..）izedconsensus,opti-CS）与实验另外两株病毒(A/Swine/Guangdong/1/01(H1N1)和rPan09)优化后的HA基因连入pCAGGS真核表达载体中，构成三种重组质粒，命名为pCA-opti-CS，pCA-opti-G11和pCA-opti-r09，在小鼠体内验证免疫效果以及对异源病毒的保护效果。结果显示：HA基因共有序列密码子优化的DNA疫苗能够诱导小鼠产生较高的抗体滴度和细胞免疫应答水平，并可有效抑制流感病毒A/Swine/Guangdong/1/01(H1N1)和rPan09HA在肺脏中的复制，减轻肺脏病理变化，具有较好的交叉保护效力，能够保护小鼠抵抗异源流感病毒的攻击。3、流感病毒M2蛋白N端的24个氨基酸M2e在流感病毒中十分保守，是诱导交叉保护性免疫的理想靶抗原。本研究将4个拷贝的M2e通过赖氨酸与通用Th细胞表位偶联获得M2e分支肽（M2e-MAP），添（文章此处忽略..）加弗氏佐剂制备了M2e分支肽疫苗（M2e-MAP+Freund），通过建立的攻毒保护试验的小鼠模型对M2e分支肽疫苗进行免疫保护效果评价。结果表明：M2e分支肽疫苗可刺激小鼠产生高滴度的M2e特异性IgG抗体，并对异源病毒H9N2的攻击提供有效的交叉保护。上述结果证实：通过密码子的优化可以显著提升基于流感HA基因DNA疫苗的免疫原性及免疫保护效果，表达H1亚型HA基因共有序列的DNA疫苗能够对异源流感病毒提供有效的交叉保护，作为通用疫苗具有广阔的应用前景。同时M2e分支肽也可作为猪流感的候选疫苗。本实验为流感通用疫苗的研制探索了新的思路，提供了理论基础。

以上为本篇毕业论文范文H1亚型流感病毒通用疫苗的构建及免疫保护效力研究的介绍部分。

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