超声介导携TFO脂质超声微泡对切应力诱导的内皮细胞组织因子表达的影响

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超声介导携TFO脂质超声微泡对切应力诱导的内皮细胞组织因子表达的影响

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毕业论文范文题目：超声介导携TFO脂质超声微泡对切应力诱导的内皮细胞组织因子表达的影响，论文范文关键词：超声介导携TFO脂质超声微泡对切应力诱导的内皮细胞组织因子表达的影响
超声介导携TFO脂质超声微泡对切应力诱导的内皮细胞组织因子表达的影响毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：背景和目的:脑血栓形成或脑栓塞是中老年人群的常见疾病之一,其高发病率及高致残率严重影响中老年人群的身体健康。预防脑血栓形成或脑栓塞,对于降低脑血管病的高发病率或高残废率具有重要意义。近年研究表明,血管壁切应力诱导内皮细胞组织因子(TF)高表达是触发血管内血栓形成的主要始发因素之一。干预内皮细胞TF表达对预防或推迟切应力性血栓形成,降低血栓性疾病的发生有重要意义。本课题设计合成反向嘌呤寡核苷酸(TFO),后者可阻断TF基因启动子区的切应力反应元件(SSRE),从而阻断TF表达,降低切应力性血栓的形成。但研究发现TFO的细胞吸收率较低,对TF的抑制效率不明显。目前有研究发现,超声微泡在超声作用下可明显提高基因的转染率,本研究利用超声微泡技术联合超声辐照,观察TFO对TF的作用效率。本实验探讨通过构建携TFO脂质超声微泡,观察超声作用下TFO在内皮细胞和动物颈内狭窄处的吸收及TFO对TF的抑制作用,目的是验证超声辐照和携TFO脂质超声微泡的联合应用对TFO的吸收促进作用及对TF的抑制效率。为进一步探索将TFO开发为保护内皮细胞、抑制颈内动脉血栓形成新型药物提供实验基础,为预防血栓形成提供新的预防治疗途径。方法:1.构建携带TFO的脂质超声微泡。普通光镜下观察携TFO脂质超声微泡外观、形态。光学显微镜下观察携TFO脂质超声微泡的荧光标记情况。以Coulter颗粒计数仪、Zetasizer3000检测粒径和粒度分布、表面电位测定。2.超声介导携TFO脂质超声微泡对TFO在内皮细胞的吸收及TF（本文此处忽略..）O对TF的抑制作用:将ECV304细胞随机分为4组:空白对照(SSRE)组,仅接受切应力作用6h;TFO+超声辐照(TFO+U)组,取60μlTFO(终浓度0.2μmol/L)加入细胞,同时给予超声处理,超声治疗头频率1MHz,占空比0.5%,声强为1W/cm2,辐照作用时间30;TFO-脂质微泡(TFO-M)组,,取60μl携带TFO脂质超声微泡(终浓度0.2μmol/L)加入细胞。TFO-脂质微泡+超声辐照(TFO-M+U)组,取60μl携带TFO脂质超声微泡(终浓度0.2μmol/L)加入细胞,同时给予超声处理,各项参数同TFO+U组。后三组进行TFO转染后24h接受切应力(压强1.2Pa)作用6h。荧光显微镜观察TFO的细胞吸收率,免疫荧光法和RT-PCR分别检测TF蛋白和mRNA的表达。3.超声介导TFO脂质超声微泡对切应力诱导的大鼠颈动脉内皮细胞TF抑制作用:将制备的携TFO超声微泡临用前低速离心,用0.9%NaCl稀释成1.0mg·mL-1混匀,在模型制备前0.5h按0.5mg·kg-1尾静脉注入。SD大鼠随机分为4组:空白对照(SSRE)组:模型制备后6h处死;TFO+超声辐照(TFO+U)组:注入同等体积0.9%NaCl稀释成1.0mg·mL-1混匀的TFO,注射同时,在大鼠颈动脉位置放置超声探头进行照射,超声治疗头频率347KHz,声强为2.4MPa,辐照作用时间2min;TFO-脂质微泡(TFO-M)组:注射携带TFO脂质超声微泡;TFO-脂质微泡+超声辐照(TFO-M+U)组:注射携带TFO脂质超声微泡,注射同时,在大鼠颈动脉位置放置超声探头进行照射,各项参数同TFO+U组。建立颈动脉狭窄动（略..）物模型,在不同条件下,免疫荧光法检测颈动脉内皮细胞TF蛋白的表达。结果1.成功构建携TFO脂质超声微泡:经FITC标记的携TFO脂质超声微泡外观呈浅黄色混悬液。光镜下观察,携TFO脂质超声微泡均呈圆形,表面光滑,大小均匀,光镜密集分布,微泡浓度约为7×109/ml左右。荧光显微镜下携TFO脂质超声微泡表面发出明亮黄绿色荧光;普通脂质微泡荧光显微镜下不可见。说明微泡脂膜上已成功包载FITC标记的TFO。携带TFO的脂质超声微泡粒径分析结果显示:IntensityMean:2092.8nmVolumeMean:2114.2nmAverageMean:2166.9nm。可见携带TFO的脂质超声微泡平均粒径为(2.20±0.35)μm,符合静脉注射要求。Zeta电位测定结果为-46.0±1.6mM,说明携带TFO的脂质超声微泡为阴离子脂质体。2.超声介导携TFO脂质超声微泡对TFO在内皮细胞的吸收及TFO对TF的抑制作用:1)荧光显微镜观察TFO的细胞吸收率:转染FITC-TFO的ECV304细胞内可见绿色荧光分布。三组均可见绿色荧光表达。TFO-M组、TFO+U组阳性细胞比TFO-M+U组明显减少。TFO-M组、TFO+U组绿色荧光表达较弱,主要分布于胞浆。TFO-M+U组可见明亮绿色荧光表达。图像分析:TFO-M+U组(38.83±6.52)的转染效率高于TFO-M组(9.50±2.88)和TFO+U组(12.66±3.01)(P0.01),后两组间无显著差异。2)免疫荧光法检测TF蛋白表达:TF蛋白呈现为红色荧光细颗粒。SSRE组ECV304细胞见大量红色荧光细颗粒,主要分布在胞浆和胞膜区域,胞核可见少量红（本文此处忽略..）色荧光细颗粒。TFO+U组、TFO-M组和TFO-M+U组较SSRE组细胞红色荧光量均有不同程度降低;且以TFO-M+U组最为显著。图像分析表示:与SSRE组(74.00±16.67)比较,TF蛋白的平均灰度值在TFO+U组(36.83±8.34)、TFO-M组(40.77±9.40)和TFO-M+U组(13.98±6.39)中的表达降低(P0.01);TFO-M+U组较TFO+U组和TFO-M组明显降低(P0.01),后两组间无显著差异。3)RT-PCR检测TFmRNA表达:SSRE组可见明显扩增TF条带;TFO+U组和TFO-M组扩增TF条带较弱;TFO-M+U组扩增TF条带最弱。TFO+U组、TFO-M组和TFO-M+U组的TF和GAPDH的扩增带的密度比值表达分别为0.36±0.07、0.38±0.07和0.11±0.02与SSRE组(0.71±0.08)相比有所降低(P0.01);TFO-M+U组明显低于TFO+U组和TFO-M组(P0.01),后两组间无显著差异。3.超声介导TFO脂质超声微泡对切应力诱导的大鼠颈动脉内皮细胞TF抑制作用:成功建立颈动脉狭窄动物模型后,在不同条件下免疫荧光法检测颈动脉内皮细胞TF蛋白的表达:SSRE组颈动脉内膜内皮细胞表达TF蛋白阳性细胞数目及着色程度显著;TFO+U组、TFO-M组和TFO-M+U组较SSRE组颈动脉内膜内皮细胞表达TF蛋白均有不同程度降低;且以TFO-M+U组最为显著。图像分析表明:与SSRE组(71.78±7.10)比较,TF蛋白的平均灰度值在TFO+U组(51.22±5.69)、TFO-M组(55.22±6.47)和TFO-M+U组(20.59±4.38)中的表达降低(P0.01);TFO-M+U组较TFO+U组和TFO-M组明显降低(P0.01),（本文此处忽略..）后两组间无显著差异。结论:1.构建的携TFO脂质超声微泡造影剂表面带负电荷,粒径大小符合静脉注射要求,以脂质超声微泡为载体携带TFO是可行的,并成功制备了携TFO脂质超声微泡造影剂。2.体外实验以人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞作为研究对象进一步证实:TF表达下降与TFO在细胞内的增加相关,TFO的转染率越高,则TF表达越低,说明TFO可以有效抑制切应力诱导的内皮细胞TF的表达,而脂质超声微泡联合超声辐照可以显著增加内皮细胞对TFO的吸收率,从而促进TFO对TF的抑制作用。3.动物实验以颈动脉狭窄动物模型作为研究对象进一步证实:TFO可抑制切应力诱导的颈动脉内膜内皮细胞TF的表达,而脂质超声微泡联合超声辐照可以促进抑制作用的发挥,有利于预防切应力性血栓的形成。

以上为本篇毕业论文范文超声介导携TFO脂质超声微泡对切应力诱导的内皮细胞组织因子表达的影响的介绍部分。

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