志贺氏菌毒力大质粒对染色体调控的研究

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志贺氏菌毒力大质粒对染色体调控的研究

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毕业论文范文题目：志贺氏菌毒力大质粒对染色体调控的研究，论文范文关键词：志贺氏菌毒力大质粒对染色体调控的研究
志贺氏菌毒力大质粒对染色体调控的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：志贺氏菌属(Shigellaspp.)细菌是一类革兰氏染色呈阴性的杆状病原菌,又称为痢疾杆菌,其重要传播道路为粪口道路,通过食品跟水进入消化道之后借助本身开释的毒力因子而冲破胃肠屏障,侵入肠上皮细胞后产生进一步的增殖跟扩散,从而引起相干炎症,机体则表示为发热、脱水、便血、腹痛及腹泻等,临床上称为细菌性痢疾,重大的情况下能导致菌血症,儿童因为本身免疫力较低而成为了重要的易感人群。并且细菌性痢疾的感染量极低,个别情况下10-100个病原菌就足以引起典范的感染症状,而这也是导致痢疾是发展中国度最重要的感染病的起因之一,据不完全统计,每年1.65亿痢疾患者中1.63亿分布于发展中国度,而在我国痢疾也有很高的发病率。另外,目前细菌性感染的重要医治手段是利用抗生素,这种方法只管在开端的时候见效很快,然而跟着病原菌本身渐变的产生,耐药菌株始终呈现,导致当初超过90%的志贺氏菌临床分别菌株对多种抗生素都存在必定程度的耐受性。只管疫苗可能作为医治痢疾的有效道路,然而因为目前尚未完全揭示志贺氏菌的详过细病机理以及宿主本身的免疫应答机制,因此这也就成为了疫苗的开发跟临床利用的瓶颈。鉴于以上志贺氏菌本身的迫害性以及目前（文章此处忽略..）医治手段的有限性,志贺氏菌的基本性研究对我国的卫生防疫工作就显得尤为急切跟必要。大肠杆菌作为一类非致病性的肠道菌,只管与志贺氏菌在表示型跟致病性方面有着非常大的差别,但古代分子生物学研究却发明二者在基因组程度上有着高度的同源性跟类似性,它们的差别重要在于毒力大质粒(virulentplasmid),所以有观点认为志贺氏菌是由大肠杆菌获得毒力大质粒进化而来的。侵袭性质粒的获得是志贺氏菌毒力性状的关键性因素。毒力大质粒是志贺氏菌胞内游离于基因组之外的一个220kb左右的环状构造,携带了侵袭跟致病所需的大部分基因。目前已有研究证明,仅仅是毒力大质粒并不能使大肠杆菌K-12获得与志贺氏菌雷同的致病性,这就阐明了从大肠杆菌到志贺氏菌的进化过程,还包含了志贺氏菌的基因组与毒力大质粒之间的协同进化,彼此适应,彼此和谐过程。比方致病适应性渐变(PathoadaptiveMutation)等于志贺氏菌通过调剂染色体上某些基因的功能,使获得毒力大质粒之后的渐变株可能改变有关的表型从而更好地适应抉择压力,或者使获得的毒力大质粒上的毒力基因可能得到充分的表白。在目前的研究中,鲜有对于志贺氏菌毒力大质粒对染（略..）色体调控的报道,而这也恰是本研究的出发点跟切入点。近多少年来,跟着基因组学的敏捷发展,已先后实现了福氏志贺氏菌2a301跟2a2457T等存在代表性菌株的测序工作,而这也为蛋白质组学研究的发展奠定了基本。本研究借助比较蛋白质组学方法从蛋白角度对志贺氏菌的基因组跟毒力大质粒之间的彼此调控进行了一系列基本性研究,这将为进一步揭示志贺氏菌的进化及致病机理提供一个新的思路跟视角。首先,本研究根据质粒不相容原理利用pKD46inc温敏型载体驱除了志贺氏菌毒力大质粒,构建了毒力大质粒无痕缺失渐变株301△pCP,M90T△pWR501。利用质粒诱动转移技巧,通过固相交配过程,在帮助质粒pRK2013的帮助下,将因整合了pXL275质粒而带有氯霉素抗性标记的志贺氏菌福氏2a2457T株、福氏2a301株以及福氏5aM90T株的重组毒力大质粒导入非致病大肠杆菌MG1655中,构建了三株大肠杆菌毒力大质粒导入渐变株MG1655/pXL275-virG:pSF、MG1655/pXL275-virG:pCP以及MG1655/pXL275-virG:pWR501。为了打消pXL275质粒的导入对实验造成的影响,利用同源重组将pXL275质粒整合到MG1655基因组中构建了阴性对比渐变株MG1655/pXL275。在此基本上对MG1655野生株、阴性对比渐变株（略..）以及三株毒力大质粒导入渐变株进行了生理生化特点的研究,成果表明:毒力大质粒以及pXL275质粒的导入对大肠杆菌MG1655的物质代谢影响不大。另外,本研究借助比较蛋白质组学方法这一重要手段对所构建的阴性对比渐变株、毒力大质粒导入渐变株、MG1655野生株,毒力大质粒无痕缺失渐变株及其对应的志贺氏菌野生株的蛋白表白进行了比较分析。制取了以上菌株37℃培养至成长晚期的全菌蛋白样品后,利用双向凝胶电泳树破了绝对应的双向电泳图谱,通过比对图谱,找出了差别表白蛋白并进行了胶内酶切跟质谱鉴定,成果表明:通过比较阴性对比渐变株跟MG1655野生株的双向电泳谱,发明pXL275质粒对MG1655的蛋白表白不产生明显的影响;通过比较毒力大质粒无痕缺失渐变株跟对应的志贺氏菌野生株的蛋白表白谱,发明毒力大质粒的驱除导致了IpaA、IpgC、VirA以及Mxi-Spa类蛋白等毒力蛋白的缺失;通过比较毒力大质粒导入渐变株跟MG1655野生株的蛋白表白谱,发明毒力大质粒的导入除了引起有关毒力蛋白的表白之外,也明显克制了MG1655酸抗性相干的谷氨酸脱羧酶的表白,而酸抗性则是与肠道菌的生存密切相干的。因为双向电泳中蛋白样品已经产生了变性裂解,所以双向电泳图（文章此处忽略..）谱中展示的是蛋白单体的信息,而细胞内大多数蛋白功能的发挥是通过与其它蛋白构成复合物来实现的,所认为了获得蛋白质彼此作用的信息,本研究又对以上菌株进行了BN/SDS-PAGE电泳,成果表明:pXL275质粒对MG1655的复合物表白不明显的影响;而毒力大质粒的导入则明显改变了MG1655中复合物品种,即对大肠杆菌中的蛋白调控网络产生了必定程度的影响。综上所述,本研究成功构建了毒力大质粒相干的缺失渐变株,导入渐变株以及阴性对比渐变株,并在此基本上获得了菌株之间蛋白单体及复合物的差别表白信息,这都为下一步深刻揭示志贺氏菌的染色体跟毒力大质粒之间的彼此调控提供了重要的线索跟视角。另外,本研究在构建毒力大质粒导入渐变株中所采取的质粒诱动转移设计也为有关重组菌株的构建提供了新的思路。

以上为本篇毕业论文范文志贺氏菌毒力大质粒对染色体调控的研究的介绍部分。

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