西尼罗病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备及B细胞表位鉴定

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西尼罗病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备及B细胞表位鉴定

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毕业论文范文题目：西尼罗病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备及B细胞表位鉴定，论文范文关键词：西尼罗病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备及B细胞表位鉴定
西尼罗病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备及B细胞表位鉴定毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：西尼罗热是一种由西尼罗病毒(WestNilevirus,WNV)引起的并通过蚊子传播的急性人畜共患感染病。WNV属于黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒属(Flavivirus),并与日本脑炎病毒(Japaneseencephalitisvirus,JEV)、圣路易脑炎病毒(Saint-Louisencephalitisvirus,SLEV)跟墨累河谷脑炎病毒(MurrayValleyencephalitisvirus,MVEV)同属日本脑炎病毒血清群。上述病原可导致重大的公共卫生问题,而且其中的两种或多种病原往往在同一地区风行,加之它们在血清学上存在重大的穿插反应,所（略..）以树破起针对上述病原的疾速、坚固的辨别诊断方法非常必要。本研究以本实验室保存的携带WNV/NY99株NS1基因的质粒pMD18-NS1为模板,通过PCR方法扩增NS1基因,并通过双酶切将NS1基因分辨亚克隆至原核表白载体pMAL-c2X跟真核表白用转移载体pFastBacHTA,构建出重组质粒pc2X-NS1跟pFast-NS1。将pc2X-NS1转化大肠杆菌TB1,并于16℃用IPTG引诱大肠杆菌TB1表白NS1蛋白。SDS-PAGE分析成果显示重组的NS1蛋白在原核表白体系中得到大量表白,并部分以可溶情势存在。之后利用直链淀粉树脂柱对该蛋白进行了纯化,Westernblot跟间接ELIS（略..）A检测表明该重组NS1蛋白能与WNV马阳性血清产生特异性反应,显示出良好的抗原性。将pFast-NS1转化DH10Bac感触态细胞,并从中提取出携带NS1基因的重组杆粒Bac-NS1。将Bac-NS1转染Sf9昆虫细胞,得到携带NS1基因的重组杆状病毒BacV-NS1。SDS-PAGE分析成果显示感染BacV-NS1的Sf9昆虫细胞表白包涵体情势的重组NS1蛋白,表白产物溶解于8M尿素中之后利用Ni+NTA树脂对其进行了纯化。Westernblot检测表明该重组NS1蛋白能与WNV马阳性血清产生特异性反应,具备良好的抗原性。以原核表白的重组NS1蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠并通（文章此处忽略..）过惯例杂交瘤技巧将免疫后小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合。以真核表白的重组NS1蛋白为检测用抗原,树破间接ELISA检测方法筛选分泌NS1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。终极获得四株能牢固分泌NS1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分辨命名为WN-1C10、WN-3C7、WN-3D10跟WN-3F1。Westernblot检测表明单克隆抗体WN-1C10、WN-3C7跟WN-3D10可与WNV-NS1蛋白产生特异性反应,而与JEV-NS1蛋白不产生反应,显示出在WNV跟JEV辨别诊断方面的良好利用前景,而WN-3F1则与两者都产生反应。为了懂得WNV-NS1蛋白上的病毒特异性B细胞表位,本研究利用单克隆抗体WN-（此处忽略..）1C10跟WN-3D10对M13噬菌体展示的12肽随机多肽库进行生物淘选,并配以Westernblot跟间接ELISA检测,终极鉴定出两个保守的WNV特异性B细胞表位,分辨为:265QGPWDEGRVE274跟27AWMDRYKYYP36本研究所制备的WNV-NS1蛋白单克隆抗体,以及所鉴定的WNV-NS1蛋白特异性B细胞表位,为树破WNV与JEV血清群其它病毒的血清学辨别诊断方法奠定了基本。

以上为本篇毕业论文范文西尼罗病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备及B细胞表位鉴定的介绍部分。

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