乙型肝炎病毒DNA聚合酶TP257抗α干扰素机制初步探讨

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乙型肝炎病毒DNA聚合酶TP257抗α干扰素机制初步探讨

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毕业论文范文题目：乙型肝炎病毒DNA聚合酶TP257抗α干扰素机制初步探讨，论文范文关键词：乙型肝炎病毒DNA聚合酶TP257抗α干扰素机制初步探讨
乙型肝炎病毒DNA聚合酶TP257抗α干扰素机制初步探讨毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus,HBV)感染是一个严重的公共卫生问题。HBV感染可导致肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌。HBV属于嗜肝DNA病毒,具有部分双链环状的DNA基因组。HBV通过特有的逆转录反应进行复制。HBV编码的DNA聚合酶/逆转录酶(DNApolymerase/Reversetranscriptase,DNApol/RT)的结构和功能在其复制过程中起重要作用。1976年,α（文章此处忽略..）-干扰素(Interferon-α,IFN-α)被成功用于治疗慢性乙型肝炎,它通过建立细胞内抗病毒状态和免疫调节作用抑制并清除病毒。但临床发现约2/3的患者对IFN-α治疗无反应,这与HBVDNA聚合酶有关。Foster等发现,HBVDNA聚合酶的末端蛋白(TP)可显著抑制细胞对IFN-α反应,并认为是由TP表达阻断IFN-α通路引起。本实验室先前通过构建一系列基因缺失突变体方式,发现HBVDNA（略..）聚合酶末端蛋白+Spacer区(部分或全部)具有抗IFN-α作用,其中末端蛋白+部分Spacer区共计257个氨基酸(TP257)抗IFN-α作用尤为明显,但其机制尚不清楚。本研究拟应用AdEasyXLAdenoviralVectorSystem表达TP257蛋白并通过免疫沉淀筛选与相互作用的细胞蛋白,初步探讨HBVDNA聚合酶TP区IFN-α作用机制,为研制新的抗HBV药物提供新的思路。为包装重组腺病毒AD-（略..）TP257,并在Huh7细胞中获得表达,首先构建穿梭载体pShuttle-IRES-hrGFP-TP257,并重组到腺病毒骨架载体pADEasy-1,通过293A细胞包装重组腺病毒,感染人肝癌细胞Huh7,Western-blot验证TP257蛋白表达;为筛选与TP257抗干扰素效应相关细胞蛋白,分别在重组腺病毒感染细胞前或感染细胞后加入IFN-α,收获细胞蛋白进行免疫沉淀,通过质谱鉴定差异蛋白。实验结果表明重组腺病毒A（略..）D-TP257能有效感染Huh7细胞并大量表达TP257蛋白;重组腺病毒AD-TP257感染细胞后加入IFN-α并通过免疫沉淀筛选到三种候选差异蛋白,经质谱鉴定分别为:热休克蛋白60、组蛋白HIST1H2BC和肌凝蛋白调节轻链12A。因此,TP257可能通过上述蛋白影响病毒的抗干扰素效应。

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