淡色库蚊溴氰菊酯抗性基因XN-P450的克隆、分析及CYP6F1的表达

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淡色库蚊溴氰菊酯抗性基因XN-P450的克隆、分析及CYP6F1的表达

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毕业论文范文题目：淡色库蚊溴氰菊酯抗性基因XN-P450的克隆、分析及CYP6F1的表达，论文范文关键词：淡色库蚊溴氰菊酯抗性基因XN-P450的克隆、分析及CYP6F1的表达
淡色库蚊溴氰菊酯抗性基因XN-P450的克隆、分析及CYP6F1的表达毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：淡色库蚊是一种分布极广的全球性卫生害虫，能够传播多种致命疾病。对其的防治主要是使用各类化学杀虫剂，这引起了杀虫剂抗性的产生和发展。淡色库蚊抗性机理及抗性基因的研究成为热点。本论文以淡色库蚊为材料进行了以下三方面的实验：1.比较使用了五种改良的方法：异硫氰酸胍法、Trizol法、Trizol+CTAB法、改良的Trizol法和CTAB法，从淡色库蚊抗性品系中提取总RNA，通过对所提总RNA的纯度、浓度、完整性以及耗用时间等方面进（本文此处忽略..）行比较，并以实时荧光定量PCR的方法来定量比较了五种方法所提取产物中RNA的拷贝数，结果显示：改良的CTAB法为淡色库蚊总RNA提取的最优法。2.以淡色库蚊抗性相关的EST（EC093830.1）序列为模板，设计基因特异性引物，通过RACE的方法克隆得到了长为1637bp的cDNA全长序列——XN-P450。确定其开放阅读框长1521bp，通过软件对其进行氨基酸、跨膜区、亚细胞定位、二级结构及酶切位点等的预测。结果表明XN-P450编码蛋白质有506个氨基酸，二级结构有53.16%的（文章此处忽略..）α螺旋，14.62%的β折叠及32.21%的环，含4个主要的跨膜螺旋；经亚细胞定位发现该蛋白多定位于线粒体和细胞质，且多在分泌通道部位，有多种酶类的切割位点，这些都指明了该蛋白是一类能够参与代谢、分泌等多种反应的膜蛋白，推测其参与了淡色库蚊的代谢抗性；通过定量PCR发现XN-P450在淡色库蚊抗性中的表达量是敏感品系的1.58倍，这进一步证实其在淡色库蚊的抗药性中扮演着代谢抗性执行者的角色。3.CYP6FI是淡色库蚊抗性基因中研究比较透彻且比较典型的一例，该基因（此处忽略..）有着抗性代谢解毒酶基因最大一类的细胞色素P450的一些保守特征。本研究合成特异性引物，并以淡色库蚊不同发育时期的幼虫、蛹及成虫所提RNA反转录得到的cDNA为模板，进行定量PCR鉴定。结果发现CYP6FI对于β-actin的相对表达量在淡色库蚊体内随着发育时期的延长在不断增加，即相对于比较敏感的幼虫，具有抗性的成虫中该基因是超表达的。综上所述，以筛选得到的最合适淡色库蚊RNA提取的方法为基础，克隆得到抗性基因XN-P450，分析其结构及所（文章此处忽略..）编码的蛋白质序列，预测其功能，并检测其在抗性与敏感品系中的表达差异，以确定该基因与抗性的相关性；定量检测CYP6FI在不同发育时期的表达量的变化趋势。通过以上三部分研究为淡色库蚊总RNA提取找到一条最优途径，并且丰富了抗性基因的内容，为新型杀虫剂的研发和使用提供了理论指导，共同为蚊虫的有效防治提供理论基础。

以上为本篇毕业论文范文淡色库蚊溴氰菊酯抗性基因XN-P450的克隆、分析及CYP6F1的表达的介绍部分。

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