食源性单核细胞增多性李斯特菌：肽核酸原位荧光检测与LMO1847蛋

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食源性单核细胞增多性李斯特菌：肽核酸原位荧光检测与LMO1847蛋

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毕业论文范文题目：食源性单核细胞增多性李斯特菌：肽核酸原位荧光检测与LMO1847蛋，论文范文关键词：食源性单核细胞增多性李斯特菌：肽核酸原位荧光检测与LMO1847蛋
食源性单核细胞增多性李斯特菌：肽核酸原位荧光检测与LMO1847蛋毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：单核细胞增多性李斯特菌(Listeriamonocytogenes,以下简称Lm或单增李斯特菌)为短小的革兰氏阳性无芽胞兼性厌氧杆菌,是食源性人畜共患病原菌。孕妇、小孩、老年人及免疫力低下人群易感,常表现为脑膜脑炎、脑炎、脓血症、流产等。在主要食源性致病菌中,单增李斯特菌引起的死亡率最高,20世纪90年代以来,WHO将其列为四大食源性疾病致病菌之一。该菌在食品加工和生产过程中可以通过多种途径污染食品,对消费者健康构成潜在威胁。因此,建立快速、敏感、特异、简单的方法用于食品及其加工环境中该菌的检测,对控制和提高食品的卫生质量具有重要意义。本研究选择单增李斯特菌表面蛋白LMO1847为研究对象,设计其编码基因的特异性引物,PCR扩增目的片段后插入原核表达载体pET30a,获得的重组质粒命名为pLMO1847,重组质粒转化大肠杆菌BL（文章此处忽略..）21感受态细胞,诱导表达并分析其产物。结果表明,LMO1847基因片段获得了融合表达,可溶性分析发现该蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在。大量表达并纯化该蛋白后,免疫家兔制备多克隆抗体,该多抗的效价高达1：25600,表明该蛋白具有良好的免疫原性。以纯化的LMO1847蛋白作为包被抗原,鼠源抗单增李斯特菌全菌多抗作为一抗,ELISA结果显示纯化蛋白与全菌多抗具有良好的反应性。以单增李斯特菌全菌作为包被抗原,LMO1847的多抗作为一抗,也呈现良好的反应活性。Western-blotting检测显示,纯化蛋白制备的多抗能够与单增李斯特菌外膜蛋白提取物中的LMO1847发生特异性反应。DOT-ELISA结果表明该多抗可与李斯特菌属的不同种发生交叉反应,但不与其它属细菌发生交叉反应,提示该蛋白可能为李斯特菌属特异性蛋白。单增李斯特菌在高盐、酸性、以及高（本文此处忽略..）温或低温的短期应激后(3小时),除5.5-NaCl处理组在1小时后LMO1847表达量略有下降外,42℃、pH5.5、pH3.0处理组表达基本稳定。但酸处理后,DOT-ELISA检测不到菌体表面的LMO1847蛋白。高盐(NaCl5.5%-8%)条件下生长时,虽然细菌外膜蛋白LMO1847表达量有所下降,但仍可通过DOT-ELISA检测到。低温(4-15℃)条件下生长时,该蛋白表达量明显降低,DOT-ELISA显示4℃时可能由于表达量太低而无法在菌体表面检测到该蛋白。该蛋白可作为高盐腌制及高温消毒食品中李斯特菌的检测靶抗原,但不适宜检测低温保存或酸性食品中李斯特菌的污染。微生物快速检测的另一领域为针对特异性基因的分子检测。本试验基于近几年发展的PNA(肽核酸)技术,结合FISH(荧光原位杂交)技术,初步建立了食品中常见致病性微生物,单增李斯特菌的快速检测方法。首先通过生物信息学（本文此处忽略..）的方法,从NCBI数据库下载李斯特菌属23SrDNA序列,运用DNASTAR软件进行比较分析,结合PNA探针设计的原则,设计了两条针对李斯特菌23SrRNA的N末端标记荧光素的PNA探针,利用其中一条PNA探针建立了液相和固相两种模式的荧光原位杂交检测方法,并优化了两种模式下的杂交条件。液相杂交最佳条件为,50：50酒精／PBS固定,浓度为107CFU/ml的菌体于(20mMTrispH9.0,100mMNaCl,0.5%SDS,300pmol/mlPNA)的杂交缓冲液中55。C杂交1.5小时,洗涤后涂片观察。固相杂交的最佳条件为,浓度为106-107CFU/ml的菌体涂片,火焰固定后于80%酒精中浸泡15min,风干,用含500pmol/mlPNA(0.2%TritonX-100)的杂交缓冲液55℃杂交1.5小时。分别用两种检测模式对李斯特菌属及部分其他属细菌进行检测,其中2株单增李斯特菌参考株、10株分离株,（略..）6个不同种的非单增李斯特菌各1株,其他属细菌4株,共22株。两种模式检测结果一致,与分离鉴定结果吻合,但不同分离株杂交效率存在差异。该探针可与李斯特菌属的5个种杂交,不与其它属细菌杂交,与理论预测符合,对李斯特菌属细菌的检测具有一定的应用价值。本研究为开发基于特异、高亲和力的抗体包被磁珠,通过免疫磁珠快速分离、富集食品中单增李斯特菌,结合PNA荧光原位杂交技术或其它方法,为食品中单增李斯特菌快速检测系统的构建奠定了基础。

以上为本篇毕业论文范文食源性单核细胞增多性李斯特菌：肽核酸原位荧光检测与LMO1847蛋的介绍部分。

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