特异性NF-κB p65siRNA烦扰对THP-1细胞增殖与凋亡的影响

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特异性NF-κB p65siRNA烦扰对THP-1细胞增殖与凋亡的影响

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毕业论文范文题目：特异性NF-κB p65siRNA烦扰对THP-1细胞增殖与凋亡的影响，论文范文关键词：特异性NF-κB p65siRNA烦扰对THP-1细胞增殖与凋亡的影响
特异性NF-κB p65siRNA烦扰对THP-1细胞增殖与凋亡的影响毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：研究背景急性白血病是一类重大迫害儿童健康的肿瘤性疾病,根据增生的白细胞品种不同,分为急性淋巴细胞白血病(acutelymphocyticleukemia,ALL)跟急性髓细胞白血病(acutemyelogenousleukemia,AML)两大类。其中AML约占儿童急白血病的25-30%,除急性早幼粒细胞白血病外,余各型化疗后果、缓解率及5年无病生存率均较差。因此开发新的AML医治方法,改良AML患儿的预后,成为儿科血.液工作者亟待解决的课题。核转录因子(nuclearfactorkappaB,NF-κB)是近年发明的与细胞增殖、凋亡密切相干的一类转录因子。NF-κB家族有5个成员,彼此结合以同源或异源二聚体的情势存在于细胞质中,其中由p50跟p65亚基组成的异源二聚体p50/p65是发明时光最早、分布最为广泛、重要发挥作用的一类核转录因子,可与多种启动子跟/或加强子的序列特异性结合,促进转录的产生,在免疫应答、炎症反应及细胞增殖与凋亡等病理生理过程中发挥重要作用。近年研究发明,NF-κB的不恰当激活与血液体系肿瘤的产生、增殖、转移及细胞耐药密切相干,对NF-κB进（本文此处忽略..）行调控目前已经成为抗肿瘤医治的热点。近年,新兴的RNA烦扰(RNAinterference,RNAi)技巧为进一步研究NF-κB的功能提供了技巧支撑。RNAi是指通过人为方法将与内源性mRNA互补的双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)导入细胞,引起特定mRNA的降解,编码的基因不能表白,引发相应基因沉默的技巧,存在高效、特异性、细胞毒性低等特点,也是基因医治的方法之一。急性单核细胞白血病是儿童AML中化疗缓解率、预后差的多少品种型之一,重要表示为异样的原始及成熟单核细胞的恶性增殖及凋亡受抑。本课题组前期实验证明,在儿童急性单核细胞白血病细胞株THP-1中有NF-κB的持续激活。假想可通过RNAi技巧克制NF-κB的表白,促进THP-1细胞的凋亡,在体外研究中为AML的基因医治提供一个新的医治靶点。研究目标本实验通过利用特异性NF-κBp65siRNA转染THP-1细胞,察看其对THP-1细胞增殖与凋亡的影响及可能机制。研究方法体外培养THP-1细胞,将处于指数成长期的细胞进行分组：①空白对比组,利用PBS液处理细胞；②阴（略..）性对比组,即NC组,利用controlsiRNA转染THP-1细胞；③实验组,利用NF-κBp65siRNA转染THP-1细胞。采取半定量RT-PCR及WesternBlot方法分辨检测p65、CyclinD1及IκBα的基因及蛋白的表白,末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(TUNEL)、AnnexinV/PI检测细胞凋亡,CCK-8测定细胞增殖。实验成果1.ControlsiRNA转染THP-1细胞的效力利用荧光素标记的controlsiRNA-FITC转染THP-1细胞,通过荧光显微镜察看转染效力,成果显示转染24小时的效力最高,达60%以上2.NF-κBp65siRNA烦扰效应的检测RT-PCR成果显示,实验组p65mRNA表白明显减低,以48小时作用最为明显,克制率达(75.52±4.02)%,而空白对比组及阴性对比组则无明显改变；WesternBlot成果显示转染48小时,空白对比组、阴性对比组及实验组中p65蛋白绝对含量顺次为2.41±0.11、2.33±0.09、0.82±0.10,p65siRNA烦扰组明显减低(P0.01),对蛋白克制率达(74.68±5.27)%。表明NF-κBp65siRNA可有效地烦扰了p65mRNA及蛋白的表白,于48小（此处忽略..）时烦扰效应最明显。3.NF-κBp65siRNA对CyclinD1mRNA及蛋白表白的影响RT-PCR及WesternBlot成果显示,转染48小时后,实验组CyclinD1mRNA及蛋白的表白明显减低,而空白对比组及阴性对比组则无明显改变。表明NF-κBp65siRNA可有效克制CyclinDlmRNA及蛋白表白。4NF-κBp65siRNA对IκBamRNA及蛋白表白的影响RT-PCR成果显示,烦扰48小时,实验组iκBamRNA表白增加,表白率达(1.25±0.05),而空白对比组及阴性对比组则无明显改变；WesternBlot成果显示空白对比组、阴性对比组及实验组中IKBα蛋白表白顺次为0.76±0.06、0.81±0.02、1.14±0.06,p65siRNA烦扰组明显升高(P0.01)。表明NF-κBp65siRNA作用后IκBα表白增加。5NF-κBp65siRNA对THP-1细胞凋亡的影响流式细胞术成果显示转染48小时,实验组THP-1细胞凋亡率(8.49±0.14)%较空白组(2.77±0.46)%及阴性对比组(2.88±0.61)%明显增加(P0.05),TUNEL方法成果显示转染48小时,实验组THP-1细胞凋亡率(16.47±1.75)%较空白组(4.30±1.47)%及阴性对比组(3.69±0.86)%%著增加(P0.05)6NF-κBp65siRN（略..）A烦扰对THP-1细胞增殖的影响CCK-8成果显示：与空白组及阴性对比组比拟较,NF-κBp65siRNA作用的实验组细胞增殖速度在第2天速度明显减慢,缺乏指数成长特点,而空白组及阴性对比组的细胞均呈指数增殖。表明NF-κBp65siRNA对THP-1细胞的增殖起克制造用。实验论断特异性NF-kBp65siRNA可有效克制NF-kBp65的表白,并可有效克制THP-1细胞的增殖,并促进其凋亡,因此可能是儿童急性单核白血病基因医治的潜在靶点之一。

以上为本篇毕业论文范文特异性NF-κB p65siRNA烦扰对THP-1细胞增殖与凋亡的影响的介绍部分。

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