β溶血性链球菌htra基因的测序鉴定及表白蛋白免疫反应性的初步研

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β溶血性链球菌htra基因的测序鉴定及表白蛋白免疫反应性的初步研

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毕业论文范文题目：β溶血性链球菌htra基因的测序鉴定及表白蛋白免疫反应性的初步研，论文范文关键词：β溶血性链球菌htra基因的测序鉴定及表白蛋白免疫反应性的初步研
β溶血性链球菌htra基因的测序鉴定及表白蛋白免疫反应性的初步研毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：研究目标：β溶血性链球菌（beta-hemolyticstreptococci,BHS）是一类可能引起人或动物感染性疾病的病原体。A组链球菌(groupAstreptococcus,GAS)可引起从喉或皮肤的浅表感染到存在高度侵袭性及潜在致逝世的感染，包含感染后重大的超敏反应肾小球肾炎、风湿性心脏病等。B、C跟G族链球菌(groupBstreptococcal,GBS,groupCstreptococcal,GCSandgroupGstreptococcal,GGS)最初都以其对动物的致病性而被发明，近多少十年来非A族链球菌与人类疾病的关联才逐步引起器重，其引起的疾病类（本文此处忽略..）似于GAS。目前已有很多BHS间基因程度转移的报道，这些基因的转移以及抉择压力使非A组链球菌获得了类似于GAS的毒力而成为为人类致病菌。细菌名义蛋白酶HtrA(hightemperaturerequirementA)首先作为管家蛋白酶被发明，其在革兰氏阳性及阴性菌的毒力中都发挥重要作用，可能帮助细菌抵抗热应激、氧化应激等。而目前对BHS中htra同源基因的分布及HtrA蛋白的免疫反应性仍知之甚少。本课题选取了HtrA蛋白编码基因为研究对象，懂得广州市儿童致咽炎β溶血性链球菌（BHS）中htra同源基因的分布；并构建了htra原核表白质粒，之后引诱原核质粒表白HtrA（略..）融合蛋白，通过Westernblot检测重组蛋白的表白，并用灭活全菌疫苗免疫小鼠，对其在BHS中的免疫反应性进行初步探讨，以进一步对HtrA在抗感染免疫中的作用进行分析，为研制以其为基本的诊断方法跟疫苗研究提供根据。研究方法：1．对我院儿科门急诊1190例患急性咽扁桃体炎的4-15岁患儿，进行咽拭子培养。鉴定为BHS者（包含A、B、C、G组溶血性链球菌共44株），提取细菌DNA；通过PCR扩增htra基因并测序；其成果在NCBI中与已知的htra序列进行同源性比对。2．PCR方法扩增htra基因并测序，测序正确后，经BamHI、XhoI双酶切后，将其克隆至原核表白质粒pGEX4T-1，转（此处忽略..）化大肠杆菌BL21，原核表白质粒通过IPTG引诱，获得了表白的重组蛋白，利用Westernblot，以抗GSTRabbitmAb鉴定重组融合蛋白表白。3．BALB/c小鼠随机分成5组，分辨为对比组跟GAS、GBS、GGS、GCS全菌免疫组，留取免疫前及免疫后血清。以BHS免疫小鼠抗血清检测目标蛋白的免疫反应性。成果：1．44株BHS的htra基因与NCBI中已知GAShtra基因的一致性均达99%以上。2．PCR方法获得了Fba基因，测序正确后，成功构建了原核表白质粒pGEX4T-1/htra.3．在大肠杆菌BL21中成功表白了HtrA重组蛋白，表白蛋白重要以包涵体情势存在。Western-b（本文此处忽略..）lot证明表白蛋白可与抗GSTRabbitmAb产生特异性结合，证明其为HtrA-GST融合蛋白。4．Westernblot显示，HtrA融合蛋白可与GAS免疫小鼠血清特异性结合，而非A组链球菌及对比组免疫血清则呈阴性成果论断：1.从患儿分别的BHS均携带与GAS雷同的htra基因，这与基因库中已知B组链球菌(GBS)、C组链球菌(GCS)htra序列不符；2.GAS感染动物后可产生抗HtrA蛋白抗体，可能认为HtrA为GAS的显性免疫原，而尚不能认为非A组链球菌中HtrA为其显性免疫原。

以上为本篇毕业论文范文β溶血性链球菌htra基因的测序鉴定及表白蛋白免疫反应性的初步研的介绍部分。

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