胰岛素样成长因子-1对氧化伤害的Schwann细胞抗凋亡的实验研究

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胰岛素样成长因子-1对氧化伤害的Schwann细胞抗凋亡的实验研究

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毕业论文范文题目：胰岛素样成长因子-1对氧化伤害的Schwann细胞抗凋亡的实验研究，论文范文关键词：胰岛素样成长因子-1对氧化伤害的Schwann细胞抗凋亡的实验研究
胰岛素样成长因子-1对氧化伤害的Schwann细胞抗凋亡的实验研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目标:施万细胞(Schwanncell,SCs)是四周神经的重要构造跟功能细胞,是四周神经体系特有的一种胶质细胞,在神经伤害后的再生跟功能恢复中起侧重要的作用。长期以来,四周神经病变重大影响着人们的生活品质,是神经科学研究范畴中的一个复杂但非常重要的病变过程。近年来的研究发明,其发病机理之一是氧化应激引起氧自由基增多,从而导致了Schwann细胞的凋亡。Schwann细胞可能包绕轴突构成有髓纤维或无髓纤维,并分泌多种神经因子参加神经体系的发育跟伤害后的再生。因此,越来越多的研究通过施加外界因素(如各种神经成长因子、中药、电磁场、硅胶管及其余移动物等)干涉Schwann细胞的生存环境,探讨可能促进四周神经伤害后的再生过程的合适方法。目前,利用神经养分因子促进神经体系成长发育的研究已经得到人们广泛的认可。胰岛素样成长因子—1(insulin-likegrowthfactor-1,IGF-1)是一种肽能神经成长因子,与组织分化、增殖跟成熟密切相干。IGF-1存在非抉择性神经养分作用,能促进外周神经再生。体外研究发明,IGF-1对各种中枢神经细胞均有神经养分跟保护作用,可能影响神经细胞的成长、存活跟分化。同时,大量实验证明,IGF-1对多种刺激因素(如缺血、缺氧,氧化应激等)引起的细胞凋亡有克制造用。IGF-1的抗氧化作用已有初步研究,但对四周神经中Schwann细胞氧化伤害的保护作用的机理尚未见报道。本课题通过树破过氧化氢引诱的（本文此处忽略..）Schwann细胞氧化伤害模型,并在此模型的基本上,察看了神经因子IGF-1对氧化伤害的Schwann细胞的保护作用,通过MTT、生化检测、吖叮橙染色、Westernblot等方法进行细胞活力测定、酶活力分析、凋亡率的分析以及凋亡蛋白Bcl-2表白程度的测定,探讨IGF-1抗氧化伤害、抗凋亡的作用机理,为揭示IGF-1医治四周神经病变的机制提供实际根据。方法:本课题从新生一周内Wistar大鼠的坐骨神经跟臂丛神经获取Schwann细胞,用含10%胎牛血清(FCS)的DMEM/F12培养液于5%CO_2、37℃、饱跟湿度的细胞培养箱中培养。Schwann细胞培养72小时后,分为3个实验组,另设一空白对比组。1.大体察看在参加H_2O_2伤害因素与IGF-1保护因素后12h时,倒置相差显微镜下察看Schwann细胞的大体状况、贴壁数量跟成长状况等情况,并照相记录。2.Schwann细胞的纯化及鉴定利用传代法纯化Schwann细胞。实验前Schwann细胞爬片作S-100免疫组化染色,鉴定Schwann细胞。3.实验分组将培养细胞分为3组:①过氧化氢伤害组:在培养基中参加终浓度为100μmol/L的H_2O_2;②IGF-1保护组:100μmol/L的H_2O_2+100ng/ml的IGF-1;③畸形组(不加任何因素);同时设破仅加培养液的空白对比组。4.MTT法进行胰岛素样成长因子-1(IGF-1)抗过氧化氢氧化伤害的作用分析。5.生化检测细胞内脂质过氧化物MDA跟超氧化物歧化酶SOD的程度。6.利用吖叮（此处忽略..）橙荧光染色察看、比较过氧化氢伤害组、IGF-1保护组跟畸形对比组细胞的存活、凋亡情况。7.畸形对比组、过氧化氢伤害组跟IGF-1保护组细胞提取总蛋白,通过SDS-PAGE及蛋白印迹(Westernblot)检测凋亡蛋白Bcl-2的表白程度变更情况。通过以上的实验,树破了过氧化氢引诱Schwann细胞的氧化伤害模型,在此模型的基本上探讨IGF-1对Schwann细胞抗氧化伤害、抗凋亡的作用机理。成果:刚接种的原代Schwann细胞呈圆形,悬浮在培养液中,接种6h后大部分细胞贴壁,部分细胞开端呈卵形,24h后变成双极,胞体饱满,破体感强,少数呈三角形,伸出三个崛起。培养48～72h后,呈现聚合景象,很多细胞聚合在一起,呈端对端、肩并肩、漩涡状或栅栏状排列,在细胞密度较低时,则凑集成堆,构成“细胞岛”,免疫细胞化学染色为S-100阳性;另一种细胞稍大,外形不规矩,呈扁平状,崛起短而多,核较浅,为成纤维细胞,所占比例较低。培养72小时掉队行传代、纯化Schwann细胞,镜下察看Schwann细胞的纯度明显增加,免疫化学染色显示80%以上的细胞S-100呈阳性反应。参加H_2O_212小时后,在倒置显微镜下察看发明细胞的状况产生改变,细胞崛起萎缩,胞体肿胀变圆、空泡化变,细胞数量减少,部分细胞脱壁,沉没于培养液中,胞体破体感差,折光度降落,并可见大量细胞碎片;IGF-1保护组的细胞成长状况良好,崛起伸展,细胞存活数量多,胞体较饱满、破体感较强,少见细胞皱缩粉碎景（此处忽略..）象,但细胞聚团景象较明显;畸形组的细胞胞体梭形、折光度好,崛起较长,细胞数量明显较多,偶有沉没逝世细胞。不同实验组检测成果如下:1.MTT法检测IGF-1抗氧化伤害的作用分析表明:IGF-1可明显拮抗过氧化氢引诱的氧化伤害,与过氧化氢伤害组比拟,IGF-1保护组可保持较高的细胞存活率,二者之间有统计学意思(P＜0.05)。同时,IGF-1保护组的细胞存活率低于畸形组,二者之间亦有统计学意思。2.生化指标SOD检测成果表明:与过氧化氢伤害组比拟,IGF-1保护组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)保持在较高的活力程度,表明IGF-1可明显拮抗过氧化氢引起的SOD降落;同时低于畸形对比组,有统计学意思(P＜0.05)。3.生化指标MDA检测成果表明:与畸形组比拟,过氧化氢引起细胞内脂质过氧化物的大量沉积,即MDA含量增加;而IGF-1可明显降落细胞内脂质过氧化物的含量(P＜0.05)。4.吖叮橙荧光染色法在荧光显微镜下察看到,产生凋亡的阳性细胞呈圆形,体积明显缩小,细胞核内可见致密浓染的黄色荧光跟凋亡小体,胞质为火焰样橘红色荧光;畸形组的Schwann细胞呈梭形,胞核圆形、卵形,呈亮绿色,胞质为灰绿色跟橙红色,亦可见少量的凋亡前期细胞。伤害组细胞量明显减少,凋亡状况典范;保护组存活细胞量增多,细胞状况明显好转。5.蛋白印迹Westernblot显示抗凋亡蛋白Bcl-2的表白情况:过氧化氢伤害组细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的表白明显下调,而参加IGF-1保护后Bcl-2蛋（此处忽略..）白表白上调(P＜0.05),畸形组的蛋白表白量最高。论断:咱们以原代培养的Schwann细胞为实验材料,利用过氧化氢引诱Schwann细胞树破氧化伤害模型,在此基本上,察看过氧化氢引诱Schwann细胞的氧化伤害作用及神经因子IGF-1对氧化伤害的Schwann细胞的保护作用。实验成果显示:过氧化氢伤害可能引起细胞内自由基的增多,SOD活力的降落,脂质过氧化物的增多,并且自由基的增多能通过信号通路上克制凋亡蛋白Bcl-2的表白而终极引起细胞的凋亡;IGF-1不仅能降落细胞内脂质过氧化物(MDA)的含量,保持细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的含量,还能通过上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表白来克制细胞逝世亡的产生,证明IGF-1可能明显拮抗过氧化氢对Schwann细胞的氧化伤害作用。本研究探讨了IGF-1对Schwann细胞氧化伤害的保护作用,从氧化伤害信号转导通路方面探讨了IGF-1的抗氧化、抗凋亡作用的分子机制,为研究四周神经病变中自由基的分子作用机制以及IGF-1等神经养分因子在在四周神经病变中的医治作用提供了必定的实际根据。

以上为本篇毕业论文范文胰岛素样成长因子-1对氧化伤害的Schwann细胞抗凋亡的实验研究的介绍部分。

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