携带神经导向因子netrin-1的腺病毒载体的构建及其在间充质干细胞

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携带神经导向因子netrin-1的腺病毒载体的构建及其在间充质干细胞

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毕业论文范文题目：携带神经导向因子netrin-1的腺病毒载体的构建及其在间充质干细胞，论文范文关键词：携带神经导向因子netrin-1的腺病毒载体的构建及其在间充质干细胞
携带神经导向因子netrin-1的腺病毒载体的构建及其在间充质干细胞毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：背景Netrins家族是一类重要的神经导向因子,在神经生长发育过程中通过作用于生长锥上的DCC或UNC5B受体来诱导或排斥轴突的生长,从而决定轴突的生长路线及轴突与特定靶细胞的功能联系。Netrins家族主要包括netrin1,netrin2,netrin3及netrin4,Ntn1是其中研究最为广泛的一员,由底板细胞所分泌。Serafini及其同事在研究脊髓的轴突外生和逆转实验中从鸡胚胎脑组织中首次分离并纯化这一分子。研究表明Ntn1不仅对中枢神经系统中纤维的投射起重要作用,而且在外周神经（此处忽略..）损伤的修复中也有一定的作用。血管系统和神经系统的发育在胚胎系统中都是十分重要的过程,也具有相似的结构和发育机制,因此二者之间可能存在共同信号进行分子“交谈”。近年的研究表明Ntn1及其受体在血管系统同样有表达。因此提出Ntn1对于糖尿病、脑血管病等同时存在血管和神经病变的疾病的治疗有其优越性。本研究通过将外源的Ntn1基因插入含GEFP标记的腺病毒载体中构建重组腺病毒,经过包装纯化而得到高转录的Ntn1重组腺病毒,为探讨Ntn1对于血管、神经的作用打下基础。方法构建携带Ntn1基因的腺病毒（略..）载体分为三个阶段:(1)采用基因克隆技术克隆目的基因Ntn1,并将目的基因克隆入含有报告基因EGFP的穿梭载体pDC316质粒;(2)构建的质粒pDC316-netrin经酶切及测序鉴定正确后,通过脂质体lipofectamine2000的介导与腺病毒包装质粒pBHGlox_E1.3Cre共转染至人胚肾细胞HEK293,经同源重组后得到携带鼠Ntn1的重组腺病毒Ad5-netrin-CMV-EGFP;(3)应用PCR鉴定重组腺病毒,空斑传代纯化病毒并反复冻融扩增病毒,获得大量具有感染能力的重组腺病毒Ad5-netrin-CMV-EG（此处忽略..）FP颗粒。以50%组织培养感染剂量法(TCID50)测定病毒滴度。原代培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,Ad5-netrin-CMV-EGFP感染骨髓间充质干细胞,并用酶联免疫吸附法检测目的基因的表达。结果本试验成功构建了表达神经导向因子Ntn1的重组腺病毒载体Ad5-netrin-CMV-EGFP。MOI50pfu/cell重组腺病毒Ad5-netrin-CMV-EGFP感染原代培养的骨髓间充质干细胞。Ad5-netrin-CMV-EGFP感染间充质干细胞48h后,ELISA检测细胞培养上清中Ntn1蛋白浓度显著（略..）高于未感染的细胞培养上清。结论本试验研究显示(1)腺病毒系统可以有效的用于转到目的基因Ntn1进入哺乳动物细胞中;(2)原代培养的间充质干细胞感染重组腺病毒Ad5-netrin-CMV-EGFP后可高水平的分泌Ntn1蛋白;(3)骨髓间充质干细胞以其低免疫性、自我增殖及较易获得等优点,可作为Ntn1基因治疗的有效平台用以促进神经损伤的修复和诱导新生血管的形成。

以上为本篇毕业论文范文携带神经导向因子netrin-1的腺病毒载体的构建及其在间充质干细胞的介绍部分。

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