内源性NOS抑制剂ADMA抗谷氨酸损伤PC12细胞的作用及其机制

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内源性NOS抑制剂ADMA抗谷氨酸损伤PC12细胞的作用及其机制

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毕业论文范文题目：内源性NOS抑制剂ADMA抗谷氨酸损伤PC12细胞的作用及其机制，论文范文关键词：内源性NOS抑制剂ADMA抗谷氨酸损伤PC12细胞的作用及其机制
内源性NOS抑制剂ADMA抗谷氨酸损伤PC12细胞的作用及其机制毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：【研究背景】谷氨酸(Glutamate,Glu)兴奋性神经毒性在缺氧-缺血性脑损伤和各种慢性退行性神经病变中起重要作用。如何减轻Glu兴奋性毒性对上述疾病的治疗具有重要意义。研究表明,谷氨酸的兴奋性毒性与一氧化氮合酶(Nitricoxidesynthase,NOS)的过度活化、一氧化氮(Nitricoxide,NO)的生产增加密切相关。非对称性二甲基精氨酸(AsymmetricDimethylarginine,ADMA)是一种广泛参与多种病理生理过程的内源性竞争性NOS抑制剂。ADMA除能通过抑制NOS活化,减少NO生成外,还能通过诱导NOS失耦联,增加氧自由基(reactiveoxygenspecies,ROS)生成、造成氧化应激损伤。（本文此处忽略..）在Glu兴奋性毒性损伤过程中,ADMA是通过抑制NOS活化、减少NO生成,减轻兴奋性神经毒性,还是通过增加ROS生成,加重兴奋性神经毒性,尚无报道。【目的】本试验以Glu损伤PC12细胞作为Glu兴奋性神经毒性的体外模型,探讨ADMA对Glu兴奋性神经毒性作用的影响及其机制。【方法】1)四甲基偶氮唑蓝(3-(4,5-Dimethylthiazol-2yl)-2,5-DiphenylTetrazoliumBromide,MTT)比色法检测细胞增殖状况;2)乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)释放试验评价细胞损伤程度;3)罗丹明123(Rhodamine123,Rh123)染色,荧光显微镜摄片及流式细胞仪(FlowCytometry,FCM)检测细胞线粒体膜电位（文章此处忽略..）(mitochondrialmembranepotential,MMP);4)双氢罗丹明(Dihydrorhodamin123,DHR)染色,荧光显微镜摄片及FCM检测细胞内ROS水平;5)NOS检测试剂盒测定细胞NOS活性;6)NO检测试剂盒测定细胞NO的生成。【结果】1.Glu对PC12细胞的兴奋性毒性作用及其机制1)PC12细胞分别与0.5mM、1mM、2mM、4mM和6mMGlu共培养24hrs,MTT法检测细胞活力显示,在1mM~6mMGlu范围内,细胞存活率随药物浓度增加而逐渐降低,呈剂量依赖性关系。2)1mM、2mM、4mMGlu处理PC12细胞24hrs,细胞LDH释放增加。3)2mMGlu处理4hrs,MMP明显降低。4)2mMGlu处理4hrs,细胞内ROS水平明显增加。5)Glu处理4hrs,可（文章此处忽略..）使PC12细胞NOS活性增加,1mMGlu组NOS活性提高了0.6倍,2mMGlu组NOS活性提高了1倍,4mMGlu组NOS活性没有继续升高。6)Glu作用4hrs,可使PC12细胞NO生成量增加,1mMGlu组NO生成量增加0.7倍,2mMGlu组NO生成量增加2倍,4mMGlu组NO生成量不再继续增加。2.ADMA抗Glu兴奋性毒性的作用及其机制1)ADMA(20~320μM)对PC12细胞无明显的毒性作用。2)不同浓度Glu处理PC12细胞前30mins,分别给予20μM、40μMADMA预处理可以对抗1mM、2mM和4mMGlu引起的细胞存活率降低。3)20μMADMA预处理可以抑制1、2和4mMGlu引起的细胞LDH释放。4)20μMADMA预处理可改善2mMGlu引起的MMP降低。5)20μMADMA预处理可减少2mMGlu（本文此处忽略..）诱导的ROS堆积。6)20μM、40μMADMA预处理可抑制2mMGlu增加细胞NOS活性。7)20μM、40μMADMA预处理可抑制2mMGlu促进NO生成。【结论】ADMA对Glu兴奋性毒性损伤PC12细胞具有保护作用,其机制可能与其抑制NOS过度活化、减少NO生成,进而降低细胞内ROS水平,改善MMP有关。

以上为本篇毕业论文范文内源性NOS抑制剂ADMA抗谷氨酸损伤PC12细胞的作用及其机制的介绍部分。

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