急性运动性轴索型神经病动物模型的建立

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急性运动性轴索型神经病动物模型的建立

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毕业论文范文题目：急性运动性轴索型神经病动物模型的建立，论文范文关键词：急性运动性轴索型神经病动物模型的建立
急性运动性轴索型神经病动物模型的建立毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：　　目的：急性运动性轴索型神经病(acutemotoraxonalneuropathy,AMAN)是格林-巴利综合征（Guillain-Barresyndrome,GBS）的一种亚型，在我国华北地区发病率较高。其临床特点是运动功能受损明显，而感觉功能大多正常，一般病情重，多有呼吸肌受累，24-48小时内迅速四肢瘫，肌萎缩出现早，病残率高，预后差。病理改变为前根和周围运动神经轴索变性，轻度脱髓鞘，病灶中炎性细胞浸润少见。目前AMAN的病因及发病机制尚未确切阐明。AMAN与急性炎性脱髓鞘性多发性神经病(acuteinflammatorydemyelinatingpolyneuropathy,AIDP)不同，因为AIDP已具有公认的动物模型，即实验性自身免疫性神经病（experimentalautoimmuneneuropathy,EAN）,可用牛P2蛋白免疫Lewis大鼠诱发，其病理及临床所见与AIDP相似，且病残率高可重复性强。而关于AMAN动物模型的研究有很多，其中本实验室曾用空肠弯曲菌（Campylobacterjejuni，Cj）免疫鸡使部分鸡发生类（文章此处忽略..）似AMAN病人的瘫痪，这个模型在国际上引起重视。但是上述模型发病率较低，用于进一步研究的实用价值有限，这促使我们进一步研究建立发病率高且可重复性强的AMAN动物模型的方法。神经节苷脂是一族酸性糖脂，它们由脂质与碳水化合物两大部分组成，是哺乳动物神经细胞膜的主要成分WP=4之一，在脑内GM1,GD1a,GD1b,GT1b这四种神经节苷脂含量丰富，其中以GM1最多，神经系统外含量甚少。大量文献报道10-42%的GBS病人血清中含有抗神经节苷脂抗体，尤其是抗-GM1抗体。有作者用GM1抗体阳性的多发性运动性神经病（multifocalmotorneuropathy,MMN）患者血清注入鼠的坐骨神经，引发了传导阻滞并发现在郎飞结处有免疫球蛋白沉积；另外也有用GD1b免疫日本大耳白兔引发感觉性轴索型神经病的报道。这使我们认识到神经节苷脂及其抗体在GBS发病中可能起重要作用。因此本研究探讨应用神经节苷脂免疫实验动物建立AMAN动物模型的方法。材料与方法：选择日本大耳白兔作为实验动物，应用牛脑神经节苷脂（BovineBrainGangliosides,BBG）或神经节苷脂GM1作（文章此处忽略..）为免疫原，与KeyholeLimpetsHemocyanin(KLH)，弗氏完全佐剂（Freund'sCompleteAdjuvant，FCA）一起于背部皮下及腹腔内两个部位注射以免疫动物，每3周1次，直至动物出现瘫痪或首次免疫后6个月仍无任何临床症状。在动物出现肢体无力后，根据其病情严重程度，于当天或发病后20天内将其处死，原则是在动物自然死亡前取材。将符合上述条件的实验动物经心脏取血处死，迅速取其左右坐骨神经，左右臂丛神经及部分脊髓的前后根，经修整后置入4%多聚甲醛固定液中。固定24小时后，可取出经磷酸盐缓冲液（PBS，PH7.4）冲洗，浸入0.5%锇酸中振荡染色1.5小时后，再用PBS（PH7.4）冲洗，之后经33%，66%，100%甘油系列脱水后可保存于100%甘油中以备分离神WP=5经单丝，观察神经变性情况。另外，在实验过程中，每周经耳静脉取血1次，放入EDTA抗凝管，轻轻摇匀经离心可得血浆，将其分装，置-25℃保存。本实验应用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测血浆中抗-GM1IgG抗体。首先将抗原GM1包被于96孔酶标板上（GM1250ng/100μl无水乙醇），在室温下蒸发干燥，之后每孔加200μl1%牛血清白蛋白-磷酸盐缓冲液（本文此处忽略..）（1%BSA-PBS，PH7.4），室温孵育2小时，PBS洗板5次，加100μl待测血浆（用1%BSA-PBS以1：500稀释，并行两孔），置4℃过夜。PBS洗板5次，空干后加HRP标记的羊抗兔IgG作为二抗（以1%BSA-PBS1：2000稀释），每孔100μl，室温孵育2小时。PBS洗板5次，加底物（10ml基质液中含4mg邻苯二胺和5μl30%H2O2）100μl作用30分钟后终止反应。在492nm处用酶标仪（anthoslabtec2010）测吸光度A值。并行两孔A值的均值为最后实测值。1%BSA-PBS做空白对照。如果空白对照A值0.2，重复实验。血浆样品孔OD值减去空白对照A值后≥0.1者为阳性，差值0者按0计算。A值结果分析采用方差分析中的Dunch新法以首次免疫前取得的血浆样品为对照，分别与首次免疫后每周取得的血浆样品中的吸光度A值进行统计学比较。结果：BBG免疫的5只兔在首次免疫后第62-144天开始发病，出现程度不等的肢体无力，且发病后病情进展较迅速，尤其是兔R-1，R-3，发病后当天即出现四肢迟缓性瘫痪，头不能抬起，且呼吸困难；GM1免疫的6只兔中有5只兔发生瘫痪，其发病距首次免疫的时间较WP=6BBG组短。在免疫过程中，兔R-2，r-1在首次免疫后1周即出（文章此处忽略..）现腹泻，但之后逐渐好转。所观察实验兔在发病前后体重变化不明显。病理分离神经单丝显示兔R-1，R-5坐骨神经、臂丛神经或脊髓的前根中出现轻至重度的类Wallerian变性，其中典型类Wallerian变性显示神经单丝髓鞘破坏崩解成数量不等的卵原形，未见节段性的髓鞘脱失，轻者可见神经单丝粗细不等，髓鞘较完整，变性神经单丝在整束神经中所占比例分别为35%、40%；兔r-2、r-4和r-6的坐骨神经、臂丛神经或脊髓的前根中可见轻至中度的类Wallerian变性，变性神经单丝所占比例分别为9%、11%、5%；兔r-6坐骨神经中可偶见神经再生。ELISA法检测兔血浆抗体示：血浆中抗-GM1IgG抗体滴度自第3-15周开始增高并持续，且所测A值在达峰

以上为本篇毕业论文范文急性运动性轴索型神经病动物模型的建立的介绍部分。

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