新型Ad/AAV嵌合病毒携带全长抗体基因对肿瘤医治作用的研究

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新型Ad/AAV嵌合病毒携带全长抗体基因对肿瘤医治作用的研究

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毕业论文范文题目：新型Ad/AAV嵌合病毒携带全长抗体基因对肿瘤医治作用的研究，论文范文关键词：新型Ad/AAV嵌合病毒携带全长抗体基因对肿瘤医治作用的研究
新型Ad/AAV嵌合病毒携带全长抗体基因对肿瘤医治作用的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：实验证明肿瘤的基因靶向医治可能进步医治后果。研究人员利用基因医治的方法,用病毒做为载体将全长抗体基因导入细胞,跟着基因的表白,细胞本身产生的抗体就可能杀逝世肿瘤细胞。在2004年,咱们实验室最早构建了携带全长抗体基因的腺病毒,实验证明其对肿瘤有良好的杀伤后果。但因为腺病毒本身的毛病导致抗体基因的表白不长效,进而限度了其临床利用。所以在基因医治过程中,载体是基因医治的关键。目前用于基因医治的病毒载体有:腺相干病毒载体(AAV)、腺病毒载体、逆转录病毒载体以及慢病毒载体等,但各种载体都不尽如人意。腺相干病毒载体(A（本文此处忽略..）AV)基因组两端的两个倒转末端反复序列(ITR)存在可能实现病毒本身复制、包装的才能,并且可能构成AAV环形旁边体,这些旁边体ITR之间为两个开放浏览框,里面可能插入目标基因。根据这一的特点,咱们在腺病毒载体里重组参加两个AAV的ITR,而后在ITR之间插入全长抗体基因序列,病毒感染靶细胞后,抗体基因可能在宿主染色体外形成环形旁边体独破表白。这种新型嵌合病毒载体集中了腺病毒容量大、起效快的长处,又存在AAV可能长效表白的长处,是一种新型的幻想病毒载体。本文先是通过Overlap-PCR的方法构建了AAV（文章此处忽略..）上游ITR(uITR)跟下游ITR(dITR)融合基因片段,再将该融合基因重组进入5型腺病毒中构成新型嵌合病毒载体,而后在新型病毒的ITR中插入抗体Cetuximab(AT2)基因片段构成携带全长抗体的新型嵌合病毒A/V659-AT2。以实验室已有携带同样抗体基因的重组腺病毒载体AD359-AT2为对比组,检测新型病毒在嵌合了AAVITR后对抗体基因表白的影响。收集两种病毒感染细胞2、4、6、8天后的细胞上清,通过ELISA跟Westernblot的方法检测Cetuximab(AT2)抗体的表白情况。ELISA成果发明,这两种病毒在体外都可能（文章此处忽略..）顺利表白AT2抗体蛋白,跟商品化的Cetuximab大小分子量雷同。并且抗体的表白量在前4天的相差不大,但在第6天对比组的抗体表白量开端降落,到第8地利表白量由最高时的138.82ng/ml降为58.49ng/ml;WesternBlot显示其在第6地利轻链重链开端不匹配,在第8地利轻链条带不明显。但携带AAVITR的新型Ad/AAV嵌合病毒的抗体表白量比较恒定,始终在110ng/ml左右,WesternBlot显示其轻重链表白量相匹配,阐明表白的抗体存在生物活性。以携带荧光蛋白基因的重组腺病毒载体AD359-EGFP为对比,用新型Ad/（本文此处忽略..）AAV嵌合载体A/V659-EGFP感染NK92细胞,在荧光显微镜下察看EGFP的表白情况,发明对比组的GFP蛋白表白情况在第6地利产生减弱,但新型嵌合载体感染的细胞GFP可能长效表白。因此咱们可能把携带抗体基因的新型病毒载体跟NK细胞结合利用,利用NK对肿瘤细胞的天然靶向性,携带病毒载体在肿瘤细胞四周富集,从而使抗体在肿瘤中大量长效表白,达到杀逝世肿瘤的目标,为当前的临床利用打下了基本。

以上为本篇毕业论文范文新型Ad/AAV嵌合病毒携带全长抗体基因对肿瘤医治作用的研究的介绍部分。

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