大菱鲆翻译把持肿瘤蛋白C末端半胱氨酸残基的生物学功能研究

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大菱鲆翻译把持肿瘤蛋白C末端半胱氨酸残基的生物学功能研究

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毕业论文范文题目：大菱鲆翻译把持肿瘤蛋白C末端半胱氨酸残基的生物学功能研究，论文范文关键词：大菱鲆翻译把持肿瘤蛋白C末端半胱氨酸残基的生物学功能研究
大菱鲆翻译把持肿瘤蛋白C末端半胱氨酸残基的生物学功能研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：翻译把持肿瘤蛋白(TranslationallyControlledTumorProtein,TCTP)是一种广泛存在于动物、动物跟真菌中的高度保守、广泛表白、表白丰度较高的蛋白,参加多种生物学过程,存在促成长、结合钙离子、促进组胺开释、抗疟疾、抗氧化等多种生物学功能,在细胞内存在重要的生物学地位。因为TCTP的表白在转录跟翻译程度上都受到高度的调控,因此研究其构造与功能之间的关联存在重要的实际跟实际意思。咱们对已知的TCTP蛋白序列进行同源比对分析时发明,大多动物的TCTP蛋白C末端高度保守,都是一个半胱氨酸(Cys)。尤其是大菱鲆(Scophthamusmaximus)翻译把持肿瘤蛋白(SmTCTP)只有1个Cys(aa170),而这个Cys就位于该蛋白的C末端。因此,探讨该蛋白末端Cys对其生物学功能的奉献对揭示该蛋白的作用机制存在重要的科学意思。已有研（略..）究表明马来丝虫(Brugiamalayi)TCTP蛋白的抗氧化功能与其分子内旁边3个Cys(aa63、aa81跟aa92)有关,因此本文首先通过Cys→Ala渐变的方法探讨了SmTCTP蛋白末端Cys对其抗氧化功能的奉献。本文根据已知的SmTCTP序列,设计渐变引物,成功构建了170Cys→Ala渐变的重组表白质粒(pET30a-Mutant-SmTCTP)。而后分辨将空载体质粒(pET30a)、未渐变SmTCTP表白质粒(pET30a-wild-SmTCTP)跟渐变表白质粒(pET30a-Mutant-SmTCTP)转化到大肠杆菌表白菌株BL21中,比较跟分析了这三种表白菌株对氧化剂H_2O_2的抗氧化才能。成果显示,在较低H_2O_2浓度(0.22mM)前提下,wild-SmTCTP表白菌的抗氧化率最高,pET30a空载菌次之,Mutant-SmTCTP表白菌最低;当H_2O_2浓度达到0.44mM时,即便以较高浓度菌液涂（此处忽略..）板,三种菌株平板上都看不到任何菌落的成长了。这表明Wild-SmTCTP存在抗氧化作用,但抗氧化才能不高,0.44mM的H_2O_2已超出了其承受极限;Cys残基对SmTCTP蛋白的抗氧化性是必须的,因为Cys残基的缺失明显降落了表白菌的抗氧化性。然而,Mutant-SmTCTP表白菌的抗氧化才能明显低于pET30a空载菌又提示咱们,Mutant-SmTCTP的表白对宿主菌是有毒性的。为了进一步验证Mutant-SmTCTP的表白对宿主菌的毒性,本文又对以上三种表白菌株(pET30a、pET30a-Wild-SmTCTP跟pET30a-Mutant-SmTCTP)的成长曲线进行了测定。成果表明,Wild-SmTCTP的表白可促进BL21菌株的成长,Mutant-SmTCTP的表白则明显克制了BL21菌株的成长,也就是说,SmTCTP的C末端Cys残基的缺失同样影响了细菌（文章此处忽略..）的成长。最后,咱们通过刹时转染技巧在体外培养鱼类细胞-牙鲆鳃细胞系(FG)中进一步研究了SmTCTPC末端Cys残基的渐变对其促成长功能的影响。咱们分辨将wild-SmTCTP跟Mutant-SmTCTP基因的编码区克隆到哺乳动物细胞表白载体pcDNA?3.1/V5-His中,利用LipofectamineLTX转染剂,将pcDNA空载体质粒、pcDNA-Wild-SmTCTP质粒跟pcDNA-Mutant-SmTCTP质粒转化到FG细胞中,过表白,比较转染后3种FG细胞的成长情况。成果显示,Wild-SmTCTP的过表白可促进FG细胞的成长,Mutant-SmTCTP的过表白则明显克制FG细胞的成长。这表明SmTCTP蛋白的促成长功能与其C末端的Cys残基有关。为了阐明SmTCTP蛋白C末端Cys影响其促成长功能的机制,咱们还猜测了SmTCT（本文此处忽略..）P蛋白的三维晶体构造。发明,C末端Cys残基位于蛋白的名义,Cys→Ala的渐变是不会影响蛋白的空间构造的。因此认为,C末端Cys残基的渐变是通过影响SmTCTP蛋白之间的二聚体化,或者SmTCTP蛋白与其受体的二聚体化来影响其促成长功能的。综上所述,本文认为Cys残基的-SH基存在还原性,是SmTCTP蛋白抗氧化才能的重要来源,但因为SmTCTP蛋白只有1个Cys残基,因此SmTCTP蛋白的抗氧化才能不高;SmTCTP蛋白可能跟成长激素存在类似的促成长机制,即SmTCTP蛋白首先与细胞膜上受体结合,而后通过SmTCTP蛋白的二聚体化使受体凑近,从而激活受体。

以上为本篇毕业论文范文大菱鲆翻译把持肿瘤蛋白C末端半胱氨酸残基的生物学功能研究的介绍部分。

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