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Schlafen2基因在细胞中的表白及其生物学意思

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毕业论文范文题目:Schlafen2基因在细胞中的表白及其生物学意思,论文范文关键词:Schlafen2基因在细胞中的表白及其生物学意思
Schlafen2基因在细胞中的表白及其生物学意思毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:研究背景:Schlafen(Slfn)家族基因是SchwarzDA等于1998年发明的参加调控胸腺发育的基因,目前对其所知甚少,所有国内外公开发表的文献只有6篇,仅有的研究表明,该家族基因缺点可引起一种胚胎致逝世性表型-DDK综合症。Schlafen家族基因作为一类新发明的基因,其在肿瘤产生发展中的作用尚不明白。Schlafen1(Slfn1)基因可通过拮抗对CyclinD1的引诱,从而导致细胞周期终止于G1期。对Schlafen2(Slfn2)的基因功能目前还不明白,而且尚未建成可能牢固表白Slfn2基因的细胞系,使其进一步研究收到了限度。因此,摸索Slfn2的基因功能对细胞在基因程度上的研究是一项簇新的课题,这势必为人类基因组的研究进展提供新的视角,从而开展更加多元化的体系研究。目标:(1)将Slfn2基因转入NI(略..)H/Swiss小鼠胚胎来源的纤维母细胞样细胞NIH/3T3中,通过绿色荧光蛋白标记察看细胞中Slfn2基因的表白及分布;(2)树破Slfn2基因牢固表白的细胞系以进一步研究其生物学功能;(3)克隆Slfn2基因启动子区序列,为今后构建双报告基因表白载体、检测荧光素酶的绝对活性从而断定跟研究小鼠Slfn2启动子的大抵区域跟绝对活性奠定基本。方法:(1)克隆Slfn2基因全编码区序列;(2)构建pEGFP-Slfn2及PCI-neo.Slfn2真核表白载体;(3)刹时转染pEGFP-Slfn2载体及其空载体对比至NIH/3T3细胞,激光共聚焦显微技巧察看细胞中Slfn2基因的表白及分布;(4)用脂质体Lipofectamine~(TM)2000分辨转染pEGFP-Slfn2与pCI-Sifn2.neo及相应空载体对比至NIH/3T3细胞,G418筛选获得抵制的细胞(文章此处忽略..)株;(5)用Northernblot核酸分子杂交技巧进一步鉴定Slfn2在各细胞株中的表白情况:(6)利用细胞成长曲线跟Transwell侵袭实验检测Slfn2对细胞增殖及迁徙才能的影响。(7)克隆Slfn2基因启动子区序列,以便后期将该序列重组至荧光素酶报告载体pGL3-Basic上,连接构成真核表白载体,与pRL-CMV共转染至NIH/3T3细胞,通过双荧光素酶活性的测定来断定跟研究小鼠Slfn2启动子的大抵区域跟绝对活性。成果:1.RT-PCR扩增出Slfn2全编码区序列片段,测序分析成果表明与Genebank中登录的Slfn2序列一致。2.所构建的pEGFP-Slfn2及PCI-Slfn2.neo真核表白载体经酶切鉴定并测序,成果表明Slfn2基因与表白载体连接方向正确且无渐变,可能进行转染。3.刹时转染对比及p(略..)EGFP-Slfn2质粒,激光共聚焦显微镜下NIH/3T3细胞中核、浆均可见到绿色荧光,阐明Slfn2在细胞核、浆均有表白。4.牢固转染pEGFP-Slfn2载体及pCI-Slfn2.neo及其相应的空载体对比于NIH/3T3细胞中,G418筛选得到抵制的细胞克隆;用Northernblot核酸分子杂交技巧鉴定并筛选出表白Slfn2的阳性细胞株;扩增培养树破细胞系。实验中获得的阳性细胞株中Slfn2基因均可正确、牢固地表白。5.绘制转染后细胞成长曲线:牢固表白Slfn2基因的细胞增殖速度明显减慢。6.利用Transwell肿瘤细胞侵袭实验分析跟检测转染后NIH/3T3细胞的迁徙才能:Sifn2基因牢固表白的肿瘤细胞迁徙侵袭才能明显降落。7.PCR扩增出Slfn2启动子区序列片段,测序分析成果表明与Genebank中登(本文此处忽略..)录的Slfn2序列一致。论断:(1)Slfn2的真核表白载体构建成功,首次获得了Slfn2基因牢固表白的细胞株。(2)Slfn2基因的牢固表白可明显影响肿瘤细胞的生物学特点,对肿瘤的成长增殖跟迁徙才能起负性调控作用,有效减缓肿瘤增殖速度,限度肿瘤蔓延扩散,即Slfn2基因的表白在肿瘤的产生发展及其转移过程中发挥侧重要的作用,可能是一个潜在的肿瘤克制基因。(3)成功克隆出Slfn2基因启动子区序列,可用于Slfn2启动子大抵区域跟绝对活性的进一步研究。


以上为本篇毕业论文范文Schlafen2基因在细胞中的表白及其生物学意思的介绍部分。
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