携带TRAIL和Smac的双基因溶瘤腺病毒完全消除Bel-7404肝癌移植瘤的研究

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携带TRAIL和Smac的双基因溶瘤腺病毒完全消除Bel-7404肝癌移植瘤的研究

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毕业论文范文题目：携带TRAIL和Smac的双基因溶瘤腺病毒完全消除Bel-7404肝癌移植瘤的研究，论文范文关键词：携带TRAIL和Smac的双基因溶瘤腺病毒完全消除Bel-7404肝癌移植瘤的研究
携带TRAIL和Smac的双基因溶瘤腺病毒完全消除Bel-7404肝癌移植瘤的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：Ⅰ.背景与目的：肿瘤的靶向基因-病毒治疗策略是将抑癌基因整合到溶瘤病毒载体上,结合了基因治疗和病毒治疗的优势。肿瘤的发生往往是由于细胞的多个基因发生突变,因此针对肿瘤的治疗应是多基因的多靶点的治疗。ZD55-TRAIL和ZD55-Smac联合治疗对肝癌有显著的治疗效果,这是肿瘤的靶向双基因-病毒治疗策略,许多双基因-病毒治疗手段己经能够完全消除裸鼠的不同类型移植瘤。但是关键的问题在于缺少一种理想的双基因连接工具,把两个抑癌基因整合到同一溶瘤病毒载体上。我们首次运用caspase-8识别位点序列(IETD)连接TRAIL和Smac基因,并利用溶瘤腺病毒载体ZD55,构建了靶向双基因溶瘤腺病毒ZD55-TRAIL-IETD-Smac（略..）,体内外实验验证其抑制肿瘤增殖的能力,我们希望其能更高效更彻底的抑制肿瘤增殖,为肿瘤的治疗提供更为有效的靶向双基因-病毒治疗方案；同时研究新型的双基因连接子IETD,希望为肿瘤的双基因治疗策略提供理想的连接工具。方法：①利用caspase-8抑制剂Z-IETD-FMK或激活剂5-FU与ZD55-TRAIL-IETD-Smac,同时体外处理肿瘤细胞,westernblot实验检测TRAIL和Smac蛋白的表达,MTT实验分析肿瘤细胞生存率的变化。②构建溶瘤腺病毒ZD55-TRAIL-IETD,与ZD55-TRAIL作比较,MTT实验分析两者抑制肿瘤增殖效果的差别。③MTT法与结晶紫染色检测ZD55-TRAIL-IETD-Smac（文章此处忽略..）体外抑制肿瘤增殖的能力及对正常细胞的毒副作用。④利用AnnexinⅤ/PI双染色法检测肿瘤细胞凋亡⑤建立裸鼠Bel-7404肝癌移植瘤模型,研究ZD55-TRAIL-IETD-Smac体内抗癌效果。⑥肿瘤组织切片的HE染色分析,TRAIL和Smac的免疫组化分析及TUNEL染色分析。结果与结论：①双基因连接工具IETD的剪切效率被caspase-8抑制剂降低,被caspase-8激活剂升高。②残留在C端的IETD四肽对TRAIL蛋白的功能几乎无影响,这为IETD介导TRAIL和其他抑癌基因进行肿瘤的双基因治疗提供的理论基础。③双基因溶瘤腺病毒ZD55-TRAIL-IETD-Smac在体外诱导肿瘤细胞凋亡对肿瘤细胞具有明显的生长（文章此处忽略..）抑制作用。④双基因溶瘤腺病毒ZD55-TRAIL-IETD-Smac对人正常细胞无明显毒性,其安全性良好。⑤双基因溶瘤腺病毒ZD55-TRAIL-IETD-Smac完全消除了裸鼠Bel-7404肝癌移植瘤,显示了明显的抑制肿瘤生长和延长荷瘤小鼠生存期的作用。⑥ZD55-TRAIL-IETD-Smac具有肿瘤特异性复制能力,能够在肿瘤的基因-病毒治疗中安全高效的使用,具有极大的临床应用前景。Ⅱ.近年来,小分子抑制剂成为抗癌研究的热点。Embelin是一种XIAP(X-linkedinhibitorofapoptosisprotein)的小分子抑制剂,它可以抑制XIAP的生成和活性,从而解除XIAP的抗凋亡作用,使凋亡顺利进行。本实验（此处忽略..）研究Embelin抑制肝癌细胞Bel-7404增殖的机制.采用不同浓度梯度,通过荧光显微镜、Hochest33342染色、MTT检测、AnnexinⅤ/PI流式细胞术和Western印迹分别检测Embelin对Bel-7404细胞的形态学变化、凋亡小体形成、细胞存活率、细胞凋亡水平、凋亡信号转导相关蛋白表达的影响.结果显示,Embelin能明显抑制Bel-7404细胞增殖,并通过激活caspase通路以及阻断NF-κB信号通路诱导Bel-7404细胞凋亡为进一步利用Embelin进行肝癌治疗的研究打下一定的基础.

以上为本篇毕业论文范文携带TRAIL和Smac的双基因溶瘤腺病毒完全消除Bel-7404肝癌移植瘤的研究的介绍部分。

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