TNF-α和PGE_2对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达的影响

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TNF-α和PGE_2对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达的影响

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毕业论文范文题目：TNF-α和PGE_2对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达的影响，论文范文关键词：TNF-α和PGE_2对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达的影响
TNF-α和PGE_2对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达的影响毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：人牙周膜成纤维细胞(Humanperiodontalligamentfibroblasts,HPDLFs)是牙周膜细胞最主要的细胞成份,不仅能合成牙周膜细胞外基质中大多数的各型胶元纤维和蛋白多糖,而且还通过分泌和合成多种多样的细胞因子与酶共同参与调节牙周组织的代谢和改建。最新研究发现,HPDLFs对核因子-κB受体活化因子配体(receptoractivatorofNF-κBligand,RANKL)及其饵受体骨保护素(osteoprotegerin,OPG)调控是这一调控机制的主要通路。因此,HPDLFs在牙槽骨骨代谢和牙周健康及疾病中扮演了重要角色。HPDLFs能够合成分泌RANKL,从而促进破骨细胞成熟,导致骨吸收;同时HPDLFs产生OPG,一种可溶性肿瘤坏死因子超家族成员,能够正向调控骨质密度。相关研究认为牙周组织中的RANKL和OPG是各种刺激因子诱导破骨细胞(osteoclast,OC（此处忽略..）)生成及功能信号传导的最终因子,与牙槽骨的吸收存在着明显的相关性。最新观点认为,HPDLFs所调控的RANKL和OPG之间的平衡机制,是牙周炎病程中牙槽骨吸收破坏的重要原因。文献报道大量炎症因子参与了牙周炎的发病机制,如肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-alpha,TNF-α)和前列腺素E_2(prostaglandinE_2,PGE_2)能够产生牙周局部炎症反应,导致牙周组织和牙槽骨的吸收破坏。虽然有实验证明由HPDLFs所分泌的炎症因子可以导致牙周炎的发生,但是HPDLFs中TNF-α和PGE_2产生这一生理学作用的细胞学和分子学机理尚未完全阐明。本实验建立HPDLFs体外培养体系,采用逆转录-聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechaieaction,RT-PCR)和荧光定量PCR(fluorescentquantitativeRT-PCR（略..）,FQ-RT-PCR)的方法,检测了体外培养的HPDLFs在TNF-α和PGE_2的作用下其RANKL、OPGmRNA的表达变化,为探讨细胞因子通过介导HPDLFs中RANKL、OPGmRNA的表达,参与牙槽骨内环境平衡调节提供参考依据。目的:研究TNF-α和PGE_2单独与联合作用于体外培养的HPDLFs,检测对其RNAKL和OPGmRNA表达的影响。方法:1.HPDLFs培养及鉴定:HPDLFs来源于临床上因正畸或阻生而拔除的健康牙,采用组织块法分离获得,进行原代培养,观察HPDLFs的生长状态及细胞形态,免疫细胞化学SP法进行鉴定。2.TNF-α对HPDLFs的RANKL和OPGmRNA表达的影响:取第5代HPDLFs用浓度为1~100ng/mlTNF-α处理24h,通过RT-PCR检测RANKL、OPGmRNA表达情况。3.PGE_2对HPDLFs的RANKL和OPGmRNA表达的影响:将10~(-9)-10~(-6)mol（文章此处忽略..）/LPGE_2.分别加入HPDLFs培养液中,共同培养2h、8h、24h和48h,通过RT-PCR检测RANKL、OPGmRNA表达强度变化。。4.TNF-α和PGE_2联合作用对HPDLFs的RANKL和OPGmRNA表达的影响:将体外培养的HPDLFs用1~100ng/mlTNF-α和10~(-8)-10~(-6)mol/LPGE_2不同浓度组合处理24h,通过FQ-RT-PCR检测RANKL、OPGmRNA表达水平。结果:1.HPDLFs增殖快,呈放射状生长,细胞呈长梭形,采用免疫组化染色,波形丝蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性。2.TNF-α作用于HPDLFs后增强RANKLmRNA表达,RANKL/OPG比值呈上升趋势,其中以10ng/mlTNF-α作用最为明显。3.10~(-9)-10~(-6)mol/LPGE_2作用于HPDLFs后,在2~24h内增强RANKLmRNA表达,抑制OPGmRNA表达,RANKL/OPG比值升高,以10-7mol/LPGE_2作用最为明显。4.（文章此处忽略..）TNF-α和PGE_2联合作用于HPDLFs,可增强RANKLmRNA表达及RANKL/OPG比值,以10ng/mlTNF-α+10-7mol/LPGE_2组合时作用最为明显。结论:1.TNF-α和PGE_2单独和联合作用均可刺激HPDLFs的RANKL/OPGmRNA表达比值,说明二者能够有效调节HPDLFs中RANKL/OPG的表达。因此,TNF-α和PGE_2可能通过作用HPDLFs,调节RANKL/OPG的比例,间接地调节破骨细胞分化和活性,参与牙槽骨的吸收。2.10ng/mlTNF-α与10-7mol/LPGE_2联合应用对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPGmRNA表达具有协同作用。

以上为本篇毕业论文范文TNF-α和PGE_2对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达的影响的介绍部分。

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