BRMS1基因对卵巢癌细胞侵袭转移的影响及其机制研究

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BRMS1基因对卵巢癌细胞侵袭转移的影响及其机制研究

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毕业论文范文题目：BRMS1基因对卵巢癌细胞侵袭转移的影响及其机制研究，论文范文关键词：BRMS1基因对卵巢癌细胞侵袭转移的影响及其机制研究
BRMS1基因对卵巢癌细胞侵袭转移的影响及其机制研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：研究背景卵巢癌严重威胁妇女生命健康,死亡率居妇科恶性肿瘤首位,五年生存率徘徊在30%左右。由于其发病隐匿,早期缺乏有效的诊断筛查方法,而且极易出现侵袭转移。因此,确诊时多为晚期,严重影响卵巢癌患者的预后。其中,侵袭转移成为卵巢癌治愈困难的瓶颈之所在。目前,基因治疗已成为卵巢癌治疗领域的研究热点,并且在动物实验及Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ期临床研究中取得了一定疗效,有望成为继手术、放化疗后的一种全新的治疗模式。有文献报道,BRMS1基因作为一种肿瘤转移抑制基因,能抑制包括卵巢癌在内的多种肿瘤的侵袭、转移。但由于其作用复杂而非典型,且具体作用机制方面的研究尚少,因此,通过细胞水平的体外实验研究BRMS1基因对卵巢癌侵袭转移的作用及其机制,可为探索控制卵巢癌侵袭和转移靶向性基因治疗的新靶点,奠（此处忽略..）定临床理论基础,具有一定的科学研究意义和潜在的临床应用价值。研究目的利用RNA干扰技术,建立瞬时转染,通过研究BRMS1基因的沉默前后,观察人卵巢癌细胞株OVCAR3侵袭、转移能力的变化,并检测与肿瘤转移相关蛋白NF-κBp65、OPN及uPA表达的差异,以探讨BRMS1基因对卵巢癌细胞侵袭、转移的作用及可能机制。研究方法1)利用细胞培养技术对人卵巢癌OVCAR3细胞株进行培养将卵巢癌细胞株OVCAR3置于含10%胎牛血清、100U/ml青霉素、100U/ml链霉素的高糖型DMEM培养液中,37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养,贴壁生长至细胞融合度80%-90%时进行转染实验。2)利用RNA干扰技术,构建BRMS1基因沉默的人卵巢癌OVCAR3细胞株根据GenBank中BRMS1基因序列设计三条靶序列siRNA以及一条阴性（此处忽略..）对照序列NC-siRNA,并交由生物技术公司合成。取生长状态好的卵巢癌细胞随机分成3组:转染组、阴性对照组及空白对照组,按照脂质体说明书进行转染。转染后48小时提取细胞总RNA和总蛋白,分别进行实时荧光定量PCR及westernblot实验,从mRNA与蛋白水平筛选并鉴定沉默效率最高的一对siRNA,进行后续实验。3)Transwell侵袭及迁移实验检测卵巢癌细胞侵袭转移能力的变化Transwell侵袭实验是将小室底部膜的上室面包被好Matrigel基质胶,上室加入上述3组转染后24h的适宜数目(每孔5×10~4个)卵巢癌细胞,培养液不含血清,下室加入10%血清的完全培养液,培养24h,小心用棉签拭净基质胶及上室面细胞,结晶紫染色后,计数穿过基质胶的下室面附着细胞数。Transwell迁移实验方法基（文章此处忽略..）本同于前者,不同的只是小室上室面不包被基质胶。4)Westernblot法、免疫细胞化学法或细胞免疫荧光法检测蛋白NF-κBp65、OPN及uPA表达的变化分别采用Westernblot法、免疫细胞化学法或细胞免疫荧光法对三种蛋白NF-κBp65、OPN及uPA进行定量和定性分析,检测这些转移相关蛋白的表达,在BRMS1基因沉默前后如何变化。5)统计学分析计量资料以均数±标准差((χ|-)±s)表示,采用SPSSl6.0统计软件,P0.05为差异具有统计学意义。结果:1.筛选出了基因沉默效率较高的BRMS1-siRNA,基因沉默效率高达82.3%,为构建逆转录病毒载体,进一步实现稳定转染奠定基础。2.BRMS1-siRNA转染人卵巢癌细胞OVCAR3,有效沉默BRMS1基因后,细胞的侵袭、转移能力较两对照组明显增强,（此处忽略..）差异有统计学意义(P0.05)。3.BRMS1-siRNA转染人卵巢癌细胞OVCAR3,有效沉默BRMS1基因后,通过Westernblot法、免疫细胞化学法或细胞免疫荧光法对肿瘤转移密切相关蛋白NF-κBp65、OPN及uPA的表达进行定性和定量分析,结果发现实验组较两对照组均明显增强,差异有统计学意义(P0.05)。结论:BRMS1基因可抑制卵巢癌细胞的侵袭、转移,机制可能与NF-κB信号转导通路有关,通过抑制NF-κB的活性,下调uPA、OPN的表达,从而实现抑制卵巢癌的远处转移。

以上为本篇毕业论文范文BRMS1基因对卵巢癌细胞侵袭转移的影响及其机制研究的介绍部分。

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