Wnt/β-catenin信号通路对肺腺癌A549细胞肿瘤干细胞特性作用研究

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Wnt/β-catenin信号通路对肺腺癌A549细胞肿瘤干细胞特性作用研究

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毕业论文范文题目：Wnt/β-catenin信号通路对肺腺癌A549细胞肿瘤干细胞特性作用研究，论文范文关键词：Wnt/β-catenin信号通路对肺腺癌A549细胞肿瘤干细胞特性作用研究
Wnt/β-catenin信号通路对肺腺癌A549细胞肿瘤干细胞特性作用研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的：不同浓度氯化锂(LiCl)作用A549细胞或利用小干扰RNA(siRNA)技术干扰A549细胞P-catenin的表达从而激活或抑制Wnt/β-catenin信号通路,观察细胞增殖、克隆形成、迁徙及耐药能力等肿瘤干细胞特性的改变,并且观察肺癌干细胞标记物OCT-4的表达变化,从而探讨Wnt/β-catenin信号通路对肺腺癌A549细胞肿瘤干细胞特性的作用并初步探讨其作用机制。方法：A549细胞经不用浓度的LiCl作用不同时间,选定最佳条件,观察其对Wnt/β-catenin通路的激活作用；β-catenin干扰质粒转染A549细胞,观察其对细胞内Wnt/p-catenin信号通路的抑制作用；观察指标：噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力、流式细胞术进行细胞周期分析、克隆形成实验观察细胞克隆形成率、Millicell小室迁徙实验测定细胞的迁徙能力、药物敏感实验观察细胞耐药能力的改变、实时(realtime)PC（文章此处忽略..）R法及westernblot蛋白印迹法检测干细胞标记OCT-4基因及蛋白水平表达的改变,研究Wnt/β-catenin信号通路激活与抑制对上述指标的作用。结果：经预试验确定LiCl的最佳作用浓度为10mmol/L,最佳作用时间为24h。A549细胞经10mmol/LLiCl作用24h后,与对照组相比,蛋白印迹实验结果显示P-catenin的蛋白水平表达增加(1.240±1.220vs0.987±0.903,P0.05),免疫组化显示P-catenin的表达出现胞浆内积聚及向胞核内转移的现象,realtimePCR结果发现Wnt/β-catenin信号通路的靶基因cyclinD1表达上调(0.023±0.006vs0.007±0.003,P0.05),Wnt/p-catenin信号通路激活；Wnt/β-catenin信号通路激活后,A549细胞的增殖能力增强,增殖率为32.24%,G0-G1期细胞明显减少[(63.3±3.205)%vs(79.81±1.5)%,P0.01],S期细胞增多[(32.866±3.631)%vs(19.513±2.508)%,P0.01],克隆形成率增加[(22.875±2.115)%vs（此处忽略..）(11.455±4.274)%,P0.01],穿过Millicell小室底膜的细胞数明显增多(52.5±4.041vs27.250±2.500,P0.01),对顺铂的耐药能力在所检测药物浓度均有不同程度的增强,OCT-4基因(0.073±0.012vs0.017±0.006,P0.01)及蛋白(0.920±0.182vs0.335±0.064,P0.01)表达水平均上调；β-catenin干扰质粒转染A549细胞后,realtimePCR结果发现β-cateninmRNA表达明显下降(0.002±0.001vs0.023±0.002,P0.01),同时Wnt/β-catenin信号通路的靶基因cyclinD1mRNA表达下调(0.005±0.002vs0.042±0.004,P0.05),此信号通路被抑制；Wnt/β-catenin信号通路抑制后,细胞的增殖能力降低,增殖抑制率为20.29%,G0-G1期细胞明显增多[(86.4±2.6)%vs(73.8±0.9)%,P0.01],S期及G2-M期细胞减少,克隆形成率降低[(31.6±7.7)%vs(46.9±7.3)%,P0.05],穿过Millicell小室底膜的细胞数明显减少(16.0±3.8vs32.7±3.1,P0.01),对顺铂的耐药能力降低,OCT-4基因[(0.016±0.011)vs(0.043±（本文此处忽略..）0.032),P0.05]及蛋白[(0.28±0.078)vs(0.555±0.088),P0.05]表达水平均下调。结论：A549细胞经10mmol/LLiCl作用24h,可激活细胞内Wnt/β-catenin信号通路；Wnt/β-catenin信号通路的激活可促进A549细胞由G1期向S期转换,从而促进细胞增殖,同时克隆形成、迁徙及耐药能力等肿瘤干细胞特性增强,肺癌干细胞标记OCT-4的基因及蛋白表达均增加；β-catenin干扰质粒转染A549细胞可抑制细胞内Wnt/β-catenin信号传导途径；Wnt/β-catenin信号通路的抑制可使细胞发生G0-G1期阻滞,抑制细胞增长,同时克隆形成、迁徙及耐药等肿瘤干细胞特性受抑制,肺癌干细胞标记物OCT-4的基因及蛋白表达均降低。以Wnt/β-catenin信号传导途径为靶点,抑制此通路在肺腺癌中的活化及其靶基因的表达,可能成为肺癌分子靶向治疗并有可能是针对肺癌干细胞治疗的新靶点。

以上为本篇毕业论文范文Wnt/β-catenin信号通路对肺腺癌A549细胞肿瘤干细胞特性作用研究的介绍部分。

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