RNAi技巧沉默Jab1基因对人喉癌Hep-2细胞增殖影响的研究

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RNAi技巧沉默Jab1基因对人喉癌Hep-2细胞增殖影响的研究

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毕业论文范文题目：RNAi技巧沉默Jab1基因对人喉癌Hep-2细胞增殖影响的研究，论文范文关键词：RNAi技巧沉默Jab1基因对人喉癌Hep-2细胞增殖影响的研究
RNAi技巧沉默Jab1基因对人喉癌Hep-2细胞增殖影响的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：研究背景与目标喉癌(LaryngealSquamousCellCarcinoma,LSCC)是耳鼻咽喉科常见恶性肿瘤,发病率近年来有明显增高趋势,目前对喉癌的医治重要是手术为主,辅以放疗、化疗跟免疫医治。但手术、放疗跟化疗并发症多,毒副作用大,病人的生活品质并不高。因此寻找新的有效、简便、毒副作用小的医治方法成为众多研究者关注的热点。RNA烦扰(RNAinterference,RNAi),也成为RNA沉默,是mRNA在双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)的介导下引起降解的景象,是生物体进化过程中的保守机制。该技巧近多少年来成为基因医治研究的热点。在癌症研究方面,它可能特异性地结合目标基因的mRNA,烦扰其转录、翻译构成蛋白质,克制癌蛋白的生成,使癌细胞向成熟方向分化或引诱癌细胞凋亡,从而达到肿瘤基因医治的目标。喉癌跟其它肿瘤一样,其产生是一种多基因、多步骤的产生过程,发病机制复杂,细胞的适度增殖及凋亡碰壁是其产生发展的基本。国（略..）内外大量文献表明,Jab1基因在癌症的产生发展中有重要作用。Jab1即C-Jun激活区域-连接蛋白1(C-Junactivationdomain-bindingprotein1,Jab1),是COP9信号复合体(COP9signalosomeregulatorycomplex,COP9)的第5个亚单位,是细胞内的可溶性蛋白,在生物体内高度保守。细胞周期素依附激酶克制因子(p27~(kip1)蛋白),是一个细胞周期负调节物,可能克制细胞周期由G_1期向S期过渡。在人类肿瘤中p27~(kip1)的变异非常少见,p27~(kip1)的调节重要是在在转录后程度,p27~(kip1)蛋白重要在细胞核内发挥作用。在喉癌方面,国内外有关Jab1基因的研究少有报道。本实验通过脂质体2000将Jab1siRNA导入喉癌Hep-2细胞中,使Jab1基因的表白受到克制,并通过不同的方法来察看Jab1siRNA对喉癌细胞Jab1基因的表白、细胞增殖跟凋亡的影响。方法1.采取免疫组化方法检测人50例喉鳞状细胞癌组织跟10例癌旁畸形组织中Jab1跟p27~(kip1)的表白。2.采（本文此处忽略..）取细胞免疫荧光方法检测喉癌Hep-2细胞中Jab1跟p27~(kip1)的表白。3.通过Lipofectamrne2000将Jab1siRNA导入喉癌Hep-2细胞,克制Jab1基因的表白,通过四甲基偶氮唑蓝(也成为噻唑蓝)光接收法(MTT法),检测Jab1siRNA在不同浓度、不同时光对Hep-2细胞增殖的影响。4.通过RT-PCR法检测Jab1siRNA转染Hep-2细胞后,Jab1基因跟p27~(kip1)基因的表白情况。5.通过流式细胞术进行细胞凋亡分析。用雷同浓度的Jab1siRNAⅡ(100nm/L)转染Hep-2细胞0、24、48、72小时后,进行Annexin-VFITC跟PI染色,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。6.利用SPSS13.0统计软件进行统计学处理。采取卡方测验跟Fisher's正确概率法进行明显性测验,相干分析采取Spearman相干性分析,多样本均数比较利用单因素方差分析,测验水准α=0.05。成果1.人喉鳞状细胞癌组织免疫组化方法检测成果:两种蛋白的阳性表白均为细胞核中呈现棕褐色颗粒。Jab1在人喉鳞癌组织中高表白,（文章此处忽略..）畸形喉黏膜中不表白或弱表白:p27~(kip1)在人喉癌组织中弱表白,在畸形喉粘膜中强表白;表明Jab1跟p27~(kip1)基因的表白与喉癌的产生关联密切。2.细胞免疫荧光成果:Jab1跟p27~(kip1)蛋白在喉癌Hep-2细胞中均有表白。3.RT-PCR扩增成果:在Hep-2细胞中有Jab1跟p27~(kip1)mRNA的表白;Jab1siRNAⅡ可降落Jab1mRNA表白,并且跟着时光的延长,Jab1mRNAⅡ在Hep-2细胞中的表白逐步减弱,而p27~(kip1)的mRNA的表白则无明显变更。Jab1siRNAⅡ对Hep-2细胞Jab1基因的mRNA表白的克制后果,比Jab1siRNAⅠ跟Jab1siRNAⅢ的克制后果明显。4.噻唑蓝光接收法(MTT)成果:Jab1siRNAⅡ转染后的Hep-2细胞与对比组细胞比拟,SDH活性之间的差别有统计学意思(P＜0.05)。5.流式细胞技巧检测成果:Hep-2细胞在Jab1siRNAⅡ的作用下,跟着作用时光的延长,细胞凋亡率逐步升高,差别明显(P＜0.05)。论断1.Jab1在人喉鳞癌组织中表白加强,畸形喉（文章此处忽略..）黏膜中不表白或弱表白;p27~(kip1)在人喉癌组织中弱表白,在畸形喉粘膜中强表白;两者在喉癌中的表白呈负相干。表明Jab1跟p27~(kip1)基因的表白与喉癌的产生关联密切。2.在Hep-2细胞中Jab1跟p27~(kip1)1蛋白均有表白。3.Jab1siRNAⅡ转染Hep-2细胞后,Jab1mRNA表白程度明显降落,细胞增殖受到克制,其克制造用有时光依附性跟剂量依附性。Jab1siRNAⅡ有促进喉癌细胞细胞凋亡作用。4.Jab1基因及其表白产物可成为喉癌生物医治的有效基因靶点。

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