带有His标签的禽流感病毒HA基因在杆状病毒表达系统中的表达

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带有His标签的禽流感病毒HA基因在杆状病毒表达系统中的表达

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带有His标签的禽流感病毒HA基因在杆状病毒表达系统中的表达毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：禽流感(AvianInfluenza,AI)是由A型流感病毒引起的禽类感染和/或烈性传染病,迄今发生的高致病性禽流感(HighlyPathogenicAvianInfluenza,HPAI)都是由H5和H7两个亚型的病毒引起的。长期以来,科学家普遍认为禽流感病毒不感染人,但97’香港禽流感事件及近年来泰国、越南和我国出现H5N1禽流感病毒直接感染人并致人死亡的事件,使得禽流感在公共卫生学具有突出意义。血凝素(Hemagglutinin,HA)基因在病毒吸附及穿膜过程中起关键作用,可刺激机体产生中和抗体来中和病毒（文章此处忽略..）的感染力,对宿主抵抗禽流感起到了决定性保护作用。基于亚单位疫苗良好的安全性和本课题组前期良好的试验结果,本研究拟改进以杆状病毒表达系统表达带有His标签的H5N1亚型HPAIV的主要免疫原性HA蛋白,为研制研制预防禽和人禽流感亚单位疫苗奠定了基础。实验共分两部分:实验一:带有His标签的禽流感病毒HA基因在Bac-N-Blue杆状病毒表达系统中的表达。经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)1.7kbHA基因的cDNA克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHis4.（文章此处忽略..）5,筛选到重组质粒命名为rpBacHisH5HA。测序正确后,在脂质体介导下,与线性化的杆状病毒DNA(Bac-N-BlueTMDNA)共转染Sf9昆虫细胞,挑取蓝色蚀斑,经三轮蚀斑纯化,获得数株重组杆状病毒rBacHisH5HA。提取重组病毒DNA经PCR证明目的基因片段已插入杆状病毒基因组。血凝试验、SDS-PAGE和Western-blot实验结果表明:HA基因在重组杆状病毒感染的HighFive细胞中获得了表达,且重组血凝素蛋白具有良好的生物活性和免疫原性。但重组HA蛋白表达量较低,本试验试（文章此处忽略..）图使用镍亲和层析纯化重组蛋白,但未得到重组HA蛋白。实验二:带有His标签的禽流感病毒HA基因在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中的表达。将禽流感病毒HA基因插入至转座载体pFastBacHTa中,构建重组质粒rpFBacH5HA,然后转化到E.coliDH5α感受态细胞中,以LB/AMP平板筛选阳性重组子,经酶切和PCR鉴定为阳性并测序正确后,再转化至E.coliDH10Bac感受态细胞中,经抗性培养和蓝白斑筛选,筛选出白色菌落,提取重组Bacmid(命名为rBacmid-H5HA,经PCR鉴（文章此处忽略..）定为阳性后,转染Sf9昆虫细胞。在昆虫细胞内,重组Bacmid经复制,表达,装配,形成重组杆状病毒,并表达了禽流感病毒株的HA蛋白。经血凝试验、SDS-PAGE和Western-blot分析,表达的HA蛋白分子量约65KD,且具有良好的生物活性和免疫学活性。间接免疫荧光试验表明重组HA蛋白被转运到sf9细胞膜上。但同样存在表达量较低的问题,经镍亲和层析,在变性条件下可获得少量蛋白,限制了重组蛋白的下一步应用。

以上为本篇毕业论文范文带有His标签的禽流感病毒HA基因在杆状病毒表达系统中的表达的介绍部分。

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