b型流感嗜血杆菌D蛋白的克隆、表达、纯化及作为结合疫苗载体的初步研究

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b型流感嗜血杆菌D蛋白的克隆、表达、纯化及作为结合疫苗载体的初步研究

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b型流感嗜血杆菌D蛋白的克隆、表达、纯化及作为结合疫苗载体的初步研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：脑膜炎奈瑟双球菌(NeisseriaMeningitidis)是唯一能引起全球性细菌性脑膜炎大规模流行的细菌,疫苗接种是用于预防的主要手段,但是传统的多糖疫苗产生抗体能力不足,对2岁以下的婴幼儿更无法产生保护作用。实验证明用细菌多糖和蛋白载体通过化学方法制备的结合疫苗,能有效克服多糖疫苗免疫时的各种缺点,诱导产生细胞免疫和加强免疫应答,并且对所有年龄组的（此处忽略..）人群都能够提供免疫保护作用。现在国内上市的结合疫苗大都使用破伤风类毒素作为载体,但其具有一定的局限性,可能会出现毒性回复或是产生载体抑制效应等问题,所以寻找安全、有效的载体是结合疫苗领域的课题之一。流感嗜血杆菌D蛋白具有良好的免疫原性和安全性,并且作为疫苗载体己应用于十价的肺炎结合苗中,在国外上市。目前,国内尚没有以D蛋白为载体疫苗的相关报道。本文（此处忽略..）通过对b型流感嗜血杆菌D蛋白基因进行扩增,构建重组质粒pET30a/hpd并转化进入大肠杆菌DH5a中,经筛选保存阳性克隆菌,再转化入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导,并使重组D蛋白以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的40%；经一步过柱纯化可得到纯度达95%的重组D蛋白。本文采用CDAP法活化A群和C群脑膜炎多糖(GAMP和GCMP),在三乙胺存在的条件下,制备A群和（略..）C群脑膜炎多糖和D蛋白结合物,并通过Sepharose4FF柱层析,对结合物组分进行多糖和蛋白含量的测定。本文将GAMP,GCMP,GAMP-D,GCMP-D,GAMP+D和GCMP+D混合物分别经皮下免疫接种Balb/c小鼠,通过间接ELISA法测定小鼠体内A群和C群脑膜炎球菌多糖特异的IgG,IgG1,IgG2a抗体水平,结果表明接种后结合物诱生的多（本文此处忽略..）糖特异性IgG,IgG1,IgG2a抗体水平显著高于不结合组,初步证明重组D蛋白能够起到载体的作用。本研究采用分子克隆技术获得了能够产生重组D蛋白的菌株,并将纯化的重组蛋白作为载体与A群和C群脑膜炎球菌多糖结合,动物实验证明结合物具有良好的免疫原性,为进一步以重组D蛋白为载体制备其它结合疫苗奠定了基础。

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