利用基因芯片技巧探讨口腔扁平苔藓发病机制的研究

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利用基因芯片技巧探讨口腔扁平苔藓发病机制的研究

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毕业论文范文题目：利用基因芯片技巧探讨口腔扁平苔藓发病机制的研究，论文范文关键词：利用基因芯片技巧探讨口腔扁平苔藓发病机制的研究
利用基因芯片技巧探讨口腔扁平苔藓发病机制的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目标:口腔扁平苔藓是一种常见的非感染性口腔黏膜疾病,不易治愈,有必定的癌变偏向。该病好发于中年人,多见于40岁以上妇女,随年纪增加症状加重。该病病因不明,发病机制盘根错节。近年来,口腔扁平苔藓的癌变病例报道呈回升趋势,因此,对口腔扁平苔藓发病机制的研究成为口腔医学研究的热点。基因芯片技巧是目前国际上崛起未多少且发展敏捷的一项生物技巧,它在生命科学范畴表演着越来越重要的角色。基因芯片技巧是目前基因研究方面最进步、最有效的方法之一,跟着生物学技巧的发展,基因芯片技巧越来越广泛利用于疾病发病机制的研究,从而发明差别表白基因。本实验利用基因芯片技巧筛选口腔扁平苔藓与畸形口腔黏膜组织差别表白基因及其信号传导通路,分析口腔扁平苔藓发病相干的差别表白基因跟信号传导通路,进而对口腔扁平苔藓的发病机制进行深刻研究。方法:1样本采集所有病变组织均来源于2008年5月至11月河北医科大学第四病院口腔科临床诊断为口腔扁平苔癣的患者,并经知情批准取病理时切取少量病变黏膜(组织病理诊断为口腔扁平苔藓的持续保存)。标本于切除后10min内装入经无菌DEPC处理的冻存管中,而后储存于液氮罐中转运到低温冰箱中保（略..）存。对比畸形组织来源于河北医科大学第四病院口腔科无菌前提下健康者拔智齿时切除的龈黏膜或口腔整复术中切除的口腔黏膜,保存方法同OLP组织标本。2芯片的制造由上海康成技巧有限公司提供的含有32050个基因的高密度基因组芯片(phalanx台湾)。取适量(50~100mg)正确保存的OLP组织样本跟畸形组织,分辨利用BioPulverize冰冻粉碎组织,加1ml的RNA抽提试剂Trizol(Invitrogen),利用Mini-Bead-Beater-16匀浆后抽提RNA。利用Nanodrop测定RNA在分光光度计230nm、260nm跟280nm的接收值,以打算浓度并评估纯度。用甲醛电泳试剂进行变性琼脂糖凝胶电泳,检测RNA纯度及完全性。获得RNAQC报告。经检测的RNA样本是高品质的,完全的,不RNase传染,不DNA传染,持续实验。样本RNA进行逆转录反应合成cDNA,cDNA第二链合成,aRNA合成及纯化,荧光标记aRNA并纯化。利用Nanodrop检测荧光标记效力,标记效力合格以保障后续芯片实验成果的坚固性。利用Ambion的RNAFragmentationReagents对标记好的aRNA进行片段化处（此处忽略..）理。在标准前提下将标记好的探针跟高密度基因组芯片进行杂交。3芯片扫描跟图像分析利用GenePix4000B芯片扫描仪扫描芯片的荧光强度,并将实验成果转换成数字型数据保存,利用配套软件(GenepixProV6.0跟Genesring)对原始数据进行分析运算,采取FoldChang跟T-test方法筛选的两组样本间的差别表白基因跟通路,以表白差别2倍为阳性,为有统计学意思。4RT-PCR验证成果的坚固性本实验为了打消实验成果中筛选差别基因的错误跟假阳性,对实验成果部分标本的部分基因采取RT-PCR验证。实验随机选取7例标本(3例畸形跟4例OLP)并随机选取3个表白上调的基因(PHF19、DBH、CD72)进行RT-PCR验证,为校订此差别,将RNA反转录合成cDNA。PCR扩增。引物序列为:GAPDH:反义5’GGGAAACTGTGGCGTGAT3’,正义:5’GAGTGGGTGTCGCTGTTGA3’,片段长度为299bp。PHF19::反义F:5’CGGGAAGATCAAGAGGGTCA3’,正义:R:5’ATGCAGCGTCGGCAGAAC3’,片段长度为276bp。DBH:反义F:5'TGGTGATAGAAGGACGAAA（文章此处忽略..）CG3',正义:R:5'GCAGTAGCCAGTGAGGATGAA3',片段长度为158bp。CD72:反义F:5'CCAAATGGTGGTTCAGGGA3',正义:R:5'GGCACAGGTTCTTGTTGGC3',片段长度为265bp。PCR反应前提:95℃变性3min,40个PCR轮回(94℃,20s;59℃,20s;72℃,30s);72oC延长5min。PCR反应同时扩增GAPDH作为内参照,复性温度及轮回次数根据不同引物及模板进行调剂PCR产物与100bpDNALadder在2%琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色,检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带并进行灰度扫描成像。RT-PCR验证成果由Rotor-GeneReal-TimeAnalysisSoftware6.0(Build14)软件处理。5统计学方法利用Spss13.0统计软件进行统计学处理,实验数据各组间比较利用单样本均数比较T测验分析,以P0.05为差别有统计学意思。成果:1经过杂交筛选并与畸形组织比较,从32050个基因中筛选出有统计学意思的差别表白基因142个,其中上调表白基因25个,下调表白基因117个。这些差别基因从分子生物学角度来说大部分是细胞渐变、生感性改变免疫应答、增殖等。从细胞组成角度来讲大多是细胞器、（此处忽略..）细胞外基质、蛋白质的合成等。从分子功能角度讲大多是黏附、催化活性、信号传导功能、酶的活性等。2有差别表白的通路8个,为感染类疾病相干通路,氨基酸、蛋白质、碳水化合物的合成跟代谢类、聚糖的生物合成跟代谢类及外源性化学物质的合成跟代谢类,与OLP密切相干通路是与参加感染类疾病的幽门螺杆菌感染上皮细胞信号传导通路(EpithelialcellsignalinginHelicobacterpyloriinfection)。论断:1.利用基因芯片可初筛选出口腔扁平苔藓差别表白基因跟信号传导通路,2.口腔扁平苔藓产生、发展过程中存在着多条不同基因的表白差别,是一种多基因变更的级联反应。3.口腔扁平苔藓的产生、发展过程中存在着信号传导功能通路表白调控的改变。

以上为本篇毕业论文范文利用基因芯片技巧探讨口腔扁平苔藓发病机制的研究的介绍部分。

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