蛋白激酶B底物AS160在有氧运动改善胰岛素抵抗过程中的作用

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蛋白激酶B底物AS160在有氧运动改善胰岛素抵抗过程中的作用

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毕业论文范文题目：蛋白激酶B底物AS160在有氧运动改善胰岛素抵抗过程中的作用，论文范文关键词：蛋白激酶B底物AS160在有氧运动改善胰岛素抵抗过程中的作用
蛋白激酶B底物AS160在有氧运动改善胰岛素抵抗过程中的作用毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的:通过高脂饲料喂养C57BL/6小鼠以建立胰岛素抵抗(IR)动物模型,观察正常饮食小鼠和IR小鼠在安静/有氧运动后骨骼肌细胞蛋白激酶B(PKB/Akt)及其下游效应因子Akt底物蛋白160(AS160)和葡萄糖转运体4(GLUT4)基因和蛋白表达的变化,探讨Akt/AS160信号通路在IR发生中的作用,以及有氧运动对IR小鼠骨骼肌细胞Akt/AS160信号通路和GLUT4转运的影响,并探究其分子生物学机制,以期为揭示有氧运动防治IR及其相关代谢性疾病提供理论依据。方法:(1)IR动物模型的建立:4周龄雄性C57BL/6小鼠80只,经过适应性喂养一周,随机分为正常饮食和高脂饮食组(每组各40只),分别饲以正常饲料和高脂饲料。喂养10周后,检测相关指标以鉴定IR模型是否成功。待模型建立后,再次将正常饮食组随机分为正常饮食安静组(NC)和正常饮食运动组(NE);高脂饮食组随机分为高脂饮食安静组(HC)和高脂饮食运动组(HE);(2)运动方案:各运动组小鼠进行为期6周、75%VO2max强度的有氧跑台训练,1次/天,60分/次,5天/周;(3)检测空腹血清胰岛素值(FINs):取材前禁食12小时,期间自由饮水,经腹膜下注射利多咔引以麻醉动物,采用摘眼球法取血约200μl,离心提取血清,ELISA法检测FINs;(4)口服葡（本文此处忽略..）萄糖耐量试验(OGTT):小鼠禁食16小时后,分别称量体重并记录。后经尾静脉取血微量,采用小型血糖仪检测空腹血糖,并将该时间点的血糖值设定为T0。随后根据体重(10μl/g)迅速给小鼠经口腔灌注20%葡萄糖溶液,分别检测灌注后T15,T30,T60,T120和T180Min各时间点的血糖值;(5)采用逆转录PCR(RT-PCR)检测骨骼肌细胞Akt、AS160和GLUT4mRNA的表达;(6)采用Westernblot法检测骨骼肌细胞Akt、AS160、GLUT4、Akt-Ser473磷酸化(pAkt-Ser473)和AS160-Thr642磷酸化(pAS160-Thr642)蛋白的表达;(7)采用免疫荧光法(IF)检测骨骼肌组织Akt、AS160、GLUT4、pAkt-Ser473和pAS160-Thr642的表达和定位:取骨骼肌组织,依次经4%多聚甲醛固定,30%蔗糖脱水,OCT包埋,冰冻切片,荧光免疫组织化学染色,共聚焦显微镜检测各目的蛋白表达和定位。结果:(1)小鼠体重变化:HC组小鼠体重较NC组增高21.99%(P0.05);HE组较HC组降低22.75%(P0.01);(2)FINs:饮食和运动之独立效应及饮食和运动之交互效应对小鼠FINs均有显著性影响。HC组小鼠FINs比NC组高77.19%(P0.01);而HE组比HC组FINs降低25.33%(P0.05);(3)OGTT:高脂饮食组中,HC组小鼠OGTT的峰值比NC（此处忽略..）组明显升高,且出现的时间点也明显后移,血糖浓度在葡萄糖灌注T30Min恢复速度迟缓,至T180Min时仍显著高于基础值。HE组与HC组相比,OGTT峰值明显下降,出现的时间点前移,随后血糖值也显著下降,但在T180Min时仍高于基础值;(4)骨骼肌细胞Akt2mRNA和Akt蛋白及pAkt-Ser473蛋白表达:HC组小鼠骨骼肌细胞Akt2mRNA(79.49±4.95vs100.00,P0.01)和蛋白(84.77±4.94vs100.00,P0.01)及pAkt-Ser473(81.53±6.36vs100.00,P0.01)表达显著低于NC组,而HE组小鼠骨骼肌细胞Akt2mRNA(92.2±4.49vs79.49±4.95,P0.01)和蛋白(94.63±4.67vs84.77±4.94,P0.05)及pAkt-Ser473(98.82±4.80vs84.77±4.64,P0.05)表达显著高于HC组。免疫荧光检测Akt蛋白和pAkt-Ser473表达趋势与Westernblot检测结果基本一致;(5)骨骼肌细胞AS160mRNA和蛋白及pAS160-Thr642蛋白表达:HC组AS160mRNA(107.89±9.44vs100.00,P0.05)和蛋白(109.25±8.00vs100.00,P0.05)与NC组无明显变化,而pAS160-Thr642蛋白(69.62±7.44vs100.00±0.00,P0.001)的表达显著低于NC组;HE组AS160mRNA(105.53±7.59vs107.89±9.44,P0.05)和蛋白(102.22±3.36vs109.25±8.00,P0.05)的表达较HC组也无显著性差异,但pAS160-Thr642蛋白(85.18±6.94vs69.62±7.44,P（本文此处忽略..）0.01)的表达显著增加。免疫荧光检测AS160和pAS160-Thr642蛋白表达结果支持Westernblot检测结果;(6)骨骼肌细胞GLUT4mRNA和蛋白的表达:HC组GLUT4mRNA(74.46±5.69vs100.00,P0.001)和蛋白(71.56±9.35vs100.00,P0.001)的表达明显低于NC组,而HE组GLUT4mRNA(95.20±7.19vs74.46±5.69,P0.01)和蛋白(85.51±4.54vs71.56±3.90,P0.05)显著高于在HC组小鼠骨骼肌组织中的表达。结论:1.Akt/AS160信号传导通路与高脂饮食诱导C57BL/6小鼠IR的发生密切相关;2.有氧运动明显增强IR小鼠骨骼肌细胞Akt、pAkt-Ser473和pAS160-Thr642的表达,并且显著提高IR小鼠骨骼肌细胞GLUT4mRNA和蛋白表达。由此推断,有氧运动可能是通过增强Akt/AS160信号传导的活性,促进骨骼肌细胞GLUT4的转运,从而提高了骨骼肌组织中葡糖糖的代谢水平。3.6周有氧运动可以显著增加小鼠骨骼肌细胞对胰岛素的敏感性,从而改善机体IR。

以上为本篇毕业论文范文蛋白激酶B底物AS160在有氧运动改善胰岛素抵抗过程中的作用的介绍部分。

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