鲤鱼抗菌肽hepcidin的基因克隆、表达及其功能的研究

搜索高级搜索

原创毕业论文

鲤鱼抗菌肽hepcidin的基因克隆、表达及其功能的研究

作者: 浏览:5次

免费专业论文
政治工作论文
计算机论文
营销专业论文
工程管理论文范文
医药医学论文范文
法律论文范文
生物专业论文
物理教学论文范文
人力资源论文范文
化学教学论文范文
电子专业论文范文
历史专业论文
电气工程论文
社会学专业论文
英语专业论文
行政管理论文范文
语文专业论文
电子商务论文范文
焊工钳工技师论文
社科文学论文
教育论文范文
数学论文范文
物流论文范文
建筑专业论文
食品专业论文
财务管理论文范文
工商管理论文范文
会计专业论文范文
专业论文格式
化工材料专业论文
英语教学专业论文
电子通信论文范文
旅游管理论文范文
环境科学专业论文
经济论文
人力资源论文范文
营销专业论文范文
财务管理论文范文
物流论文范文
财务会计论文范文
数学教育论文范文
数学与应用数学论文
电子商务论文范文
法律专业论文范文
工商管理论文范文
汉语言文学论文
计算机专业论文
环境艺术专业论文
信息计算科学专业
物流专业论文范文
人力资源论文范文
教育管理论文范文
现代教育技术论文
小学教育论文范文
机械模具专业论文
报告,总结,申请书
理工科专业论文
心理学论文范文
学前教育论文范文

毕业论文范文题目：鲤鱼抗菌肽hepcidin的基因克隆、表达及其功能的研究，论文范文关键词：鲤鱼抗菌肽hepcidin的基因克隆、表达及其功能的研究
鲤鱼抗菌肽hepcidin的基因克隆、表达及其功能的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：抗菌肽是一类具有抗菌活性的内源性小分子多肽,广泛存在于生物界,具有广谱杀菌作用,且不会产生耐受性,是机体非特异性免疫的重要组成部分。Hepcidin是一类富含半胱氨酸的抗菌肽,在肝脏中的表达量较高,又称之为肝脏表达的抗菌多肽,在体内或体外具有抑制细菌、真菌及原生动物生长的作用,并且具有调节机体铁代谢的功能。本文根据斑马鱼hepcidincDNA序列设计引物,克隆得到鲤鱼hepcidin的cDNA片段,然后采用RACE技术得到其全长cDNA,并对其编码的多肽结构和系统进化进行了分析;采用PCR方法扩增得到了鲤鱼hepcidin的基因组DNA序列,并对其内含子-外显子结构进行了分析;采用RT-PCR方法检测了hepcidinmRNA在正常鲤鱼肝脏、脾脏、头肾、前肠、后肠、口腔上皮、鳃、皮肤、肌肉、性腺（略..）和血液等组织的分布,采用Real-timePCR技术检测了鳗弧菌浸泡刺激后鲤鱼肝脏、头肾、前肠和后肠中hepcidinmRNA水平的变化;构建了原核表达载体pET32a(+)/hepcidin,并转入大肠杆菌AD494(DE3)中诱导表达,表达的融合蛋白经肠激酶酶切后,采用抑菌圈法检测其对大肠杆菌的抑菌活性。鲤鱼hepcidincDNA全长647bp,由46bp的5'非翻译区(5'-UTR),276bp的开放阅读框(ORF)和325bp的3'非翻译区(3'-UTR)组成,其中ORF区编码91个氨基酸的前体hepcidin,由24个氨基酸残基的信号肽、42个氨基酸残基的前域和25个氨基酸残基的成熟肽组成。鲤鱼hepcidin成熟肽由25个氨基酸组成,含有8个保守的半胱氨酸残基,通过4个链内二硫键形成短的发卡结构,拐角处有一特殊的二硫键,可能与多肽的抗菌活性直接相关。鲤鱼hepcidi（略..）n基因组DNA全长1209bp,由三个外显子和两个内含子组成,外显子1编码部分5'-UTR、信号肽和部分前域,外显子2编码部分前域,外显子3编码部分前域、成熟肽和3'-UTR。序列比对和系统进化表明,鱼类hepcidin序列之间的相似性较高,而鱼类与哺乳动物和两栖动物处于不同的分支上,在鱼类中,鲤鱼与斑马鱼、鲶鱼处于同一分支,其中,鲤鱼与斑马鱼的亲缘关系最近。RT-PCR检测表明,在正常鲤鱼中,肝脏中hepcidinmRNA水平最高,其次为脾脏、后肠、头肾、前肠、口腔上皮、皮肤、性腺和血细胞,在鳃中的水平较低,而在肌肉中则未检测到其mRNA。Real-timePCR检测表明,鲤鱼经过鳗弧菌浸泡刺激后,各组织hepcidinmRNA水平整体呈现先升高后下降的趋势,但不同组织的变化模式并不相同。肝脏、头肾和后肠hepc（此处忽略..）idinmRNA水平在刺激后6h就达到最大值,肝脏中约为正常水平的3倍,头肾和后肠可达到正常水平的17倍;前肠hepcidinmRNA水平在刺激后6h开始升高,到72h才达到最大值,约为正常水平的8倍。鲤鱼hepcidin成熟肽cDNA长75bp,本实验在其两端设计带酶切位点的引物,PCR扩增片段双酶切后与pET-32a(+)质粒连接,构建pET-32a(+)/hepcidin原核表达载体,重组质粒经双酶切和测序鉴定正确后,用于后续的诱导表达。pET-32a(+)/hepcidin重组质粒转化大肠杆菌AD494(DE3),经IPTG诱导融合蛋白的表达,超声裂解细菌,SDS-PAGE检测,细菌裂解上清和包涵体沉淀中在分子量为20kD处均有一特异性条带,与hepcidin融合蛋白的预期分子量(20.2kD)基本一致。以可溶性形式表达的融合蛋白在诱导后2h开始出现,以后表达（本文此处忽略..）量逐渐升高,到第6h时达到最大比例,稳定至10h后又逐渐下降;以包涵体形式表达的融合蛋白也是在诱导后2h开始出现,以后有所升高,但没有明显的规律,且相应诱导时间的表达量低于可溶性形式表达的融合蛋白。因此,在后续的融合蛋白的大量诱导实验中,采用诱导6h的可溶性形式的融合蛋白,结果表明,融合蛋白的浓度明显高于小量诱导的蛋白,可以用于下一步的实验。大量诱导表达的hepcidin融合蛋白经肠激酶酶切后,采用抑菌圈法检测表明,其对大肠杆菌具有一定的抑菌活性。因此,原核表达的hepcidin可以用于hepcidin功能的进一步研究。

以上为本篇毕业论文范文鲤鱼抗菌肽hepcidin的基因克隆、表达及其功能的研究的介绍部分。

本论文在医药医学论文栏目，由论文网(www.zjwd.net)整理,更多论文,请点论文范文查找

收费专业论文
汉语言文学论文
物理学论文
自动化专业论文
测控技术专业论文
历史学专业论文
机械模具专业论文
金融专业论文
电子通信专业论文
材料科学专业论文
英语专业论文
会计专业论文
行政管理专业论文
财务管理专业论文
电子商务国贸专业
法律专业论文
教育技术学专业论文
物流专业论文
人力资源专业论文
生物工程专业论文
市场营销专业论文
土木工程专业论文
化学工程专业论文
文化产业管理论文
工商管理专业论文
护理专业论文
数学教育专业论文
数学与应用数学专业
心理学专业论文
信息管理专业论文
工程管理专业论文
工业工程专业论文
制药工程专业论文
电子机电信息论文
现代教育技术专业
新闻专业论文
热能与动力设计论文
教育管理专业论文
日语专业论文
德语专业论文
轻化工程专业论文
社会工作专业论文
乡镇企业管理
给水排水专业
服装设计专业论文
电视制片管理专业
旅游管理专业论文
物业管理专业论文
信息管理专业论文
包装工程专业论文
印刷工程专业论文
动画专业论文
营销专业论文范文
工商管理论文范文
汉语言文学论文范文
法律专业论文范文
教育管理论文范文
小学教育论文范文
学前教育论文范文
财务会计论文范文

电子商务论文范文

上一篇：鳞癌细胞的hB7-H3基因转染及其检测

下一篇：成人骨性下颌偏斜与脊柱冠状面形..