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SOD1启动子上调多肽筛选体系的树破

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毕业论文范文题目：SOD1启动子上调多肽筛选体系的树破，论文范文关键词：SOD1启动子上调多肽筛选体系的树破
SOD1启动子上调多肽筛选体系的树破毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：超氧化物岐化酶(superoxidedismutase,SOD)是一种广泛存在于生物体内的金属酶,根据分布的不同重要分为SOD1(Cu/ZnSOD,重要分布于真核细胞胞浆),SOD2(Mn/FeSOD,重要分布于真核细胞线粒体跟原核细胞)跟SOD3(EC-SOD,重要分布于细胞外基质),不同的SOD均有催化超氧阴离子自由基O_2~-产生歧化反应的功能,是体内重要的氧自由基清除剂。其中,SOD1是发明最早,研究最广泛的一类。氧自由基是直接或间接由分子氧转化而成,外层轨道存在未配对电子的一类化学分子,包含超氧离子自由基、羟自由基、过氧化氢等。它们存在活泼的化学活性,极易产生得到或失去电子的反应,从而引发链式自由基反应。体内的氧自由基包含因为高温、辐射等起因导致某些含氧分子共价键断裂而产生的外源性自由基跟体内各种代谢过程中产生的内源性氧自由基。氧自由基是机体代谢畸形的旁边产物,低浓度的氧自由基是机体履行畸形生理功能所必须,但在氧自由基异样增多或机体抗氧化才能降落的情况下,氧自由基将通过链式自由基反应伤害细胞膜、DNA、蛋白质等多种细胞组分。目前已知氧自由基与衰老、炎症、缺血再灌注伤害、神经退行性病变等多种疾病相干,清除多余的氧自由基对延长（文章此处忽略..）动物寿命,加强其对氧应激的承受才能跟改良炎症状况等多个方面存在明显的作用。机体重要通过两阶段的反应来清除体内的氧自由基:第一阶段是超氧阴离子自由基在SOD的作用下改变为氧气跟过氧化氢;第二阶段是过氧化氢在过氧化氢酶(catalase,CAT)的作用下改变为水跟氧气。SOD在氧自由基的清除过程中起着至关重要的作用。SOD缺点的大肠杆菌将无奈在有氧前提下生存,而适量增加的SOD则能起到减少细胞内氧自由基含量,减轻脂质体过氧化乃至延缓衰老、把持炎症等多种作用。可见,通过把持SOD在体内的含量,可能调节氧自由基的浓度并从而改变多种相干的病理、生理状况,存在极其重要的临床意思。皮肤皱纹的产活力制包含外源性因素跟内源性因素两个方面。外源性因素重要有日光照射所致的光老化跟其余环境因素如外伤、感染、空气传染等对皮肤的伤害;内源性因素重要有年纪增加导致的基因调控变更、内源性自由基对细胞的伤害跟机体代谢的混乱。目前国际上重要针对光老化跟内源性氧自由基对皮肤的伤害这两个方面进行抗皱研究。光老化指日光长期照射所致的皮肤老化,日光中的紫外线可通过产生高度反应的外源性氧自由基伤害皮肤。此外,紫外线最早伤害的部位为调节SOD跟过氧化氢酶的基（略..）因,使二者合成减少,以致氧自由基凑集而伤害细胞。由上述可见,在皮肤皱纹产生的内源性跟外源性道路中,过高浓度的氧自由基都表演侧重要角色。因此,清除体内过高的氧自由基对皮肤抗皱存在重要的意思。假如能适度进步皮肤细胞内SOD含量,则可能通过减少氧自由基的含量来减少对皮肤的伤害,从而保护皮肤,减少皱纹。固然针对SOD的研究已有多年,但目前还不可能实际进入临床利用的SOD类药物,这是因为SOD作为一种蛋白质药物,存在制备价格昂贵,不能直接进入细胞发挥作用、半衰期短、易诱发免疫反应等缺点,且具体利用剂量也不易把持。目前针对SOD药用方面的研究重要包含研究药物载体、发明SOD的小分子调换物跟寻找能上调内源性SOD表白药物等道路,据此,咱们设计了一个利用报告基因技巧筛选存在上调内源性SOD1表白的随机多肽筛选体系,试图同时克服上述多种问题。报告基因是指其表白产物易被检测且易与内源性背景蛋白相差别的基因。通过将特定基因的转录把持元件克隆到报告基因载体,可能通过报告基因的表白来直观地检测目标基因的表白情况。红色荧光蛋白(redfluorenscentprotein,RFP)是一种分子量为28kD的荧光蛋白,可主动发射荧光、无需任何帮助因（本文此处忽略..）子跟底物的参加,且无需裂解细胞即可检测活体组织跟细胞的基因表白,作为报告基因存在其特有的优胜性。本研究利用基因重组技巧构建了含人SOD1启动子区的红色荧光蛋白报告基因质粒,并通过转染跟抗生素筛选技巧得到了能牢固表白该质粒的细胞系。此细胞系在合适浓度的SOD1引诱剂卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯(phorbolmyristateacetate,PMA)刺激下,红色荧光蛋白表白明显增加,红色荧光强度在必定范畴内呈线性增加。这为筛选存在内源性SOD1表白上调功能的药物提供了一个便利、灵敏的工具。为了克服蛋白质大分子常存在的免疫原性,咱们利用持续的十二个随机氨基酸组成的多肽作为筛选的对象。因为细胞膜存在抉择性通透性,大部分蛋白质分子无奈直接进入细胞内部发挥生理学效应。咱们选用Ⅰ型人类免疫缺点病毒(humanimmunodeficiencyvirusⅠ,HIV-Ⅰ)Tat蛋白的蛋白转导域(proteintransductiondomain,PTD)作为携带多肽入胞的载体。HIV-Tat是一种以非传统内吞道路、非能量依附,非受体介导方法直接穿透细胞膜进入细胞的多肽,它能携带多种不同大小跟性质的生物活性物质如核苷酸、多肽、蛋白质等进入细胞,是一种幻（略..）想的多肽转运载体。此外,融合蛋白中的加强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)可作为蛋白入胞的唆使剂,提示随机多肽在细胞内的分布情况。针对肽库的容量性跟多样性问题,咱们利用点渐变技巧引入36个随机碱基,构成随机表白文库,切实践容量达到20~(12),从而保障了随机多肽库的容量性跟多样性。为了可能进行高通量的多肽筛选,咱们总结出一套切实可行的蛋白纯化及药物筛选流程。利用融合蛋白上的His标签纯化融合蛋白,将纯化后的融合蛋白与牢固表白报告基因质粒的细胞孵育必定时光后,融合蛋白进入细胞,通过测量细胞荧光强度的变更来断定多肽对SOD1启动子的影响,从而为后续大范围的筛选奠定了基本。综上所述,本研究利用报告基因技巧跟细胞系筛选技巧得到了能作为人SOD1启动子表白情况检测标准的细胞系,并利用基因重组跟点渐变技巧得到了包含随机多肽序列、跨膜转运载体跟示踪用绿色荧光蛋白的随机多肽库,在两者的基本上开发出一套可能用以筛选上调内源性SOD1表白的随机多肽药物的筛选流程,从而为后续的药物筛选工作提供了有力的支撑。

以上为本篇毕业论文范文SOD1启动子上调多肽筛选体系的树破的介绍部分。

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