外周血EPCs的体外培养及aspirin对EPCs迁徙功能影响的研究

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外周血EPCs的体外培养及aspirin对EPCs迁徙功能影响的研究

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毕业论文范文题目：外周血EPCs的体外培养及aspirin对EPCs迁徙功能影响的研究，论文范文关键词：外周血EPCs的体外培养及aspirin对EPCs迁徙功能影响的研究
外周血EPCs的体外培养及aspirin对EPCs迁徙功能影响的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：背景:内皮祖细胞(EPCs)属于造血干细胞的一个亚群,它们直接参加体内血管新生跟修复。Asahara等人于1997年成功地从人类外周血中分别出表白CD34,Flk-1,或AC133抗原阳性的细胞,并被证明为EPCs。轮回血中EPCs归巢到机体的相应部位并分化为内皮细胞,参加构成新生血管,这个过程称之为出生后血管产生。血管产生以往被认为只存在于胚胎期的血管新生过程中,但近来的很多研究证明:出生后同样可能存在血管产生。最近的动物实验研究证明:外源性EPCs移植对下肢跟心脏缺血性病变产生必定的医治后果,这为临床缺血性血管疾病的医治提供了新思路。研究目标:通过研究,摸索改进人外周血中EPCs分别跟体外培养的方法,探明人外周血中EPCs体外培养的成长特点,找寻最佳细胞干涉时代,为人外周血EPCs的研究奠定基本。同时（文章此处忽略..）,利用Transwell培养皿模仿体外EPCs的迁徙过程,察看阿司匹林对EPCs的体外迁徙功能的影响,旨在为临床缺血性血管疾病医治中阿司匹林的公道利用提供参考。方法:本研究方法缭绕着EPCs分为彼此关联的两部分一、人类外周血内皮祖细胞的分别、培养与鉴定:无菌前提下采集健康捐献者外周静脉血20ml,应用Ficoll密度梯度离心法,将惯例的2000rpm调剂至1200rpm,分别外周血中单个核细胞(MNCs),经过细胞计数,台盼蓝染色鉴定细胞活力后,用含有10%优级胎牛血清的人类内皮祖细胞培养基按惯例进行培养。对培养所得的细胞每日在倒置相差显微镜下察看细胞成长状况学变更,观测评估细胞成长过程。并进行EPCs特点跟功能的鉴定:1、VEGFR-2、CD133、vWF的免疫荧光检测;2、细胞摄取acLDL跟结合UEA-1实验。二、阿司（文章此处忽略..）匹林对内皮祖细胞迁徙功能的影响:在第一部分研究的基本上,抉择培养7天的细胞进行这一步研究。将培养7天的细胞消化,重悬,计数后将悬液放入Transwell培养皿的上室。将含有不同浓度阿司匹林的含血清培养液参加到Transwell培养皿的下室,将Transwell培养皿放入细胞培养箱中培养24h后计数迁徙到低层的细胞,以察看评估细胞迁徙才能。通过与无阿司匹林的含血清培养液组比较,观测不同浓度作用雷同时光或同一浓度作用不同时光,阿司匹林对人外周血中EPCs迁徙功能的影响。成果:将离心速度调剂至1200rpm后,每ml外周血经Ficoll密度梯度离心法分别可得到MNCs1×10~6～2×10~6个,台盼蓝染色后活细胞百分率在95±3%。培养后早期细胞大多为圆形或卵形,混有少量纺锤形细胞,第5天起,部分圆形大单核细胞转化为梭形贴壁内（文章此处忽略..）皮祖细胞;7天左右呈现由数十个细胞构成的细胞集落,并可见到细胞呈条索状排列;10天左右,细胞变为长梭形,彼此交联;14天后细胞开端衰老、崩解,数量减少。在培养的第7天,细胞成长性状最佳,通过检测,细胞的内皮祖细胞系特异性标记因子VEGFR-2、CD133与vWF表白良好,摄取acLDL跟结合UEA-1实验均呈强阳性。选取培养第7天的细胞,采取Transwell培养皿检测阿司匹林对EPCs迁徙才能的影响,在200倍显微镜下计数Transwell膜底面的迁徙细胞。无阿司匹林对比组26.8±1.73,参加1mmol/L阿司匹林组24.3±1.94,参加2mmol/L阿司匹林组20.1±2.57,参加5mmol/L阿司匹林组13.1±1.87,参加10mmol/L阿司匹林组9.2±1.58。经统计分析证明,参加阿司匹林组Transwell膜底面细胞数较对比组明显减少,跟着参加阿司匹林的（本文此处忽略..）浓度增加,Transwell膜底面细胞数的减少幅度更为明显。论断:1、在25～37℃前提下,采取离心速度为1200rpm的密度梯度离心法可能良好的分别人外周血单个核细胞,以满意EPCs培养的须要。2、内皮祖细胞的表型鉴定跟活性测定显示其茂盛成长期在培养后的第7—10天,在此期间,其增殖活泼,成长情况较好,是进一步进行研究的最佳时代。3、在Transwell培养过程中,1mmol/L的阿司匹林就能对EPCs的体外迁徙产生克制造用,这种克制造用存在明显的浓度跟时光依附性。

以上为本篇毕业论文范文外周血EPCs的体外培养及aspirin对EPCs迁徙功能影响的研究的介绍部分。

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