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禾谷镰刀菌PTC1基因敲除及功能初探

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毕业论文范文题目：禾谷镰刀菌PTC1基因敲除及功能初探，论文范文关键词：禾谷镰刀菌PTC1基因敲除及功能初探
禾谷镰刀菌PTC1基因敲除及功能初探毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：禾谷镰刀菌(Fusariumgramminearum)是引起小麦赤霉病的重要致病因子,是小麦第二大真菌性病害,由该病原菌侵染引起的产量丧失跟真菌毒素传染重大影响小麦产量跟品德,迫害食品、饲料的保险,因此在农业出产上存在重要意思。自从1990年代以来,我国跟世界其余小麦重要出产国的小麦赤霉病暴发频率都在增加,病害范围始终扩大。多菌灵等化学杀菌剂的广泛利用,已使我国部分小麦主产区的病菌产生必定抗药性,化学杀菌剂的持续大量利用,将有可能增加小麦赤霉病的暴发危险。目前,对禾谷镰刀菌的研究热点逐步集中在弄清其致病机理（略..）跟发明新的药物作用靶点。对禾谷镰刀菌中的功能基因研究,正处在起步阶段。本研究以禾谷镰刀菌中重要信号转导道路的关键调控基因为研究切入点,目标在于初步揭示调控基因的分子,细胞跟生物学功能,从而懂得重要信号转导道路在调控该菌的成长、发育、与寄主的侵染辨认、致病性等方面的作用。在真核细胞模型菌酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)中,PTC1基因编码的蛋白是一种2C型丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酯酶,通过对有丝决裂原激活的蛋白激酶Hog1p的去磷酸作用,克制HOG(高浸透压甘油)道路,是HOG-MAPK（本文此处忽略..）道路的负调节因子,而HOG道路与菌丝的构成有密切关联。本研究采取正向遗传学方法研究禾谷镰刀菌FgPTC1基因的功能。咱们从禾谷镰刀菌的基因组数据库中搜查到酿酒酵母ScPTC1同源的基因FgPTC1,基因FgPTC1中含有一个内含子,其ORF(OpenReadingFrame)长为1743bp。通过在体外构建基因敲除盒,转化禾谷镰刀菌原生质体,基因敲除盒DNA在体内与目标基因产生同源重组,从而敲除目标基因的敲除策略,将FgPTC1基因的ORF用抗药遗传标记基因调换掉,从而使转化菌株显示特定抗药性。成果咱们获得1株FgPT（文章此处忽略..）C1基因的禾谷镰刀菌缺失株。以该FgPTC1基因缺失株为研究对象,禾谷镰刀菌野生型PH-1菌株为对比,在平板上设计各种实验打算,进行了表型筛选实验,发明缺失菌株对氯化锂的敏感性增加,在低温下菌落成长速度明显减慢,并且在室内致病力实验中表示出与野生型致病性的差别。本研究还应用比较基因组学方法,摸索了FgPTC1基因在模式真菌酿酒酵母中的互补功能。为此,咱们提取野生型禾谷镰刀菌菌株PH-1的总RNA,通过反转录(ReverseTranscription)的方法,在体外获得PH-1菌株的总cDNA。以此cDNA为模板（文章此处忽略..）,在FgPTC1基因ORF两端设计特定引物,PCR获得FgPTC1基因不含有内含子的ORF克隆,并将其亚克隆到带有强启动子ADH的酵母表白质粒上,转化酵母ScPTC1基因的缺失菌株,对目标转化子进行平板表型实验。成果咱们发明FgPTC1基因可能互补酿酒酵母ScPTC1基因在氯化锂抗性方面的功能,表明FgPTC1基因跟酿酒酵母ScPTC1基因是同功基因。本工作为进一步研究FgPTC1基因调控禾谷镰刀菌成长,发育跟致病性奠定了基本。

以上为本篇毕业论文范文禾谷镰刀菌PTC1基因敲除及功能初探的介绍部分。

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