疥螨原肌球蛋白基因的克隆、表达与蛋白定位研究

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疥螨原肌球蛋白基因的克隆、表达与蛋白定位研究

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毕业论文范文题目：疥螨原肌球蛋白基因的克隆、表达与蛋白定位研究，论文范文关键词：疥螨原肌球蛋白基因的克隆、表达与蛋白定位研究
疥螨原肌球蛋白基因的克隆、表达与蛋白定位研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：疥螨病是一种常见的人兽共患寄生虫病,具有高度传染性,能导致人和动物剧痒及各种类型的皮炎,是一种顽固性、接触性、传染性皮肤病。长期药物治疗疥螨病存在药物残留、环境污染等问题。目前尚无可用于免疫防治的疥螨疫苗。尽管寄生虫疫苗的研制较为困难,但相信随着分子生物学的不断发展,疥螨基因文库的不断完善,疥螨基因工程疫苗将会成为防治疥螨病最有前（本文此处忽略..）景的方法之一本研究参考GenBank中收录的粉尘螨(D17682)、屋尘螨(AF016278)和痒螨(AM114276)原肌球蛋白(Tropomyosin)基因序列设计引物,对提取的疥螨总RNA进行RT-PCR扩增与克隆,测序结果得到了855bp的目的基因片段。通过对该基因核苷酸序列进行分析,与已报道的粉尘螨、屋尘螨和痒螨原肌球蛋白(Tm)基因的序列同源性分别为87.60%,85.26%和85.03%。预测其表达的重组（略..）蛋白大小约为50.90kDa,理论等电点值为pI=4.43,具有很强的亲水性。推导的化学式为C[39]H2318N412O4878S10,带负电荷。该蛋白不存在信号肽切割位点,也不存在跨膜结构域,是一种膜外蛋白。将目的片段插入pET32a(+)表达载体上,将测序正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用浓度为1.0mM/L的IPTG诱导表达了疥螨原肌球蛋白,通过SDS-PAGE分析表明,在（略..）相对分子质量约50kDa处有明显的表达条带。进一步优化诱导表达条件,结果表明该重组蛋白在37℃温度下,IPTG浓度为0.4mol/L,诱导4h时基本达到最大表达量。用兔疥螨阳性血清作为一抗进行免疫印迹反应,发现重组表达蛋白可与兔疥螨阳性血清反应,产生蛋白免疫印迹带,说明表达的重组蛋白具有抗原性。将纯化的重组蛋白与弗氏佐剂混合制备乳剂苗,用其免疫（本文此处忽略..）家兔,获得高免血清,并通过免疫组织化学SP技术,对疥螨原肌球蛋白进行组织定位,试验结果表明该蛋白主要在疥螨口器和四肢的肌肉,躯体表皮以及内脏器官表膜中表达。

以上为本篇毕业论文范文疥螨原肌球蛋白基因的克隆、表达与蛋白定位研究的介绍部分。

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