鸡贫血病病毒和马立克氏病毒实验室检测方法的建立和应用

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鸡贫血病病毒和马立克氏病毒实验室检测方法的建立和应用

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毕业论文范文题目：鸡贫血病病毒和马立克氏病毒实验室检测方法的建立和应用，论文范文关键词：鸡贫血病病毒和马立克氏病毒实验室检测方法的建立和应用
鸡贫血病病毒和马立克氏病毒实验室检测方法的建立和应用毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：近年来,免疫抑制性病毒越来越受到人们的关注。鸡群中存在免疫抑制性病毒的感染,会使鸡群对其它病毒或细菌不仅变得更为易感,而且使其感染的症状、病变不典型。除此之外,还会造成鸡群对某些疫苗的免疫反应下降甚至不反应,导致免疫失败。可引起免疫抑制的病毒很多,主要有鸡马立克氏病病毒(MDV)、鸡传染性贫血病病毒(CAV)、J亚群禽白血病病毒(ALV-J)、网状内皮组织增殖症病毒(REV)、鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)和呼肠孤病毒(ReoV)等。这些病毒往往共同作用,以二重感染或多重感染的方式造成鸡的免疫抑制,使疾病的诊断更加复杂。鉴于以上原因,建立准确可行的检测免疫抑制性病毒的方法是非常必要的。在本研究中我们设计了四个试验,对CAV和MDV的检测方法及某些毒株的免疫抑制性进行了初步研究。试验1我们以山东省某肉鸡场14日龄疑似鸡贫血病病毒(CAV)感染的发病鸡为例对CA（文章此处忽略..）V的实验室诊断方法进行了研究。从病料中直接提取组织DNA,其余病料的研磨上清接种MDCC-MSB1细胞(简称MSB1)。通过聚合酶链式反应(PCR)技术和抗CAV特异性高免血清的间接免疫荧光反应(IFA)进行检测,证明分离到了鸡贫血病毒,暂命名为C14。试验1结果表明该鸡群中存在CAV的感染。在本研究中我们发现,用IFA方法检测CAV感染特异性强,阳性检出率为6/9,但所需时间相对较长。用PCR方法检测感染病料的MSB1细胞基因组DNA和病料组织DNA,阳性检出率分别为4/9、2/9。从该研究的结果可知用病料上清接种MSB1细胞后,用IFA对CAV检测更加可靠。试验2我们将试验1中用IFA技术和PCR技术鉴定为阳性的鸡贫血病毒C14株接种SPF鸡胚后测定其病毒效价。将试验1中用PCR扩增的鸡贫血病毒特异性片段用于标记CAV探针,用核酸斑点杂交试验测定C14病毒的EID50。同时将C（本文此处忽略..）14毒株按10-4-10-7稀释后卵黄囊接种12枚8日龄鸡胚,将C14病毒接种的出壳鸡饲养至7日龄时称取体重,进行红细胞记数并计算免疫器官指数。同时用核酸斑点杂交、PCR两种方法分别对胸腺、WP=11脾脏、骨髓进行CAV检测。试验2结果证明胚胎接种该C14病毒出壳的鸡,免疫器官均受到不同程度的损害,该病毒可引起严重的免疫抑制;在两种对CAV进行检测的方法中,核酸斑点杂交方法具有敏感、特异的优点,并且一次可以检测的样品数量较大,是CAV检测的好方法。试验3,用1日龄非免疫鸡接种马立克氏病病毒(MDV)I型RB1B株6天后,采血分离外周血液单核细胞(PBMCs)。将PBMCs部分作成悬液,部分固定涂片,用间接免疫荧光试验(IFA)检测MDV在外周血液单核细胞(PBMCs)的感染状况。试验3结果发现,自接种I型强毒RB1B株后第6天,两种方法均能检出RB1B株引起的病毒血症,对两种检测MDV的方法进行（此处忽略..）比较可知,直接对PBMCs悬液做间接免疫荧光试验(IFA)具有特异、敏感、阳性结果易判断等优点。利用这种方法可以大致判断鸡群被感染的状态,并且可以检测MDV疫苗的免疫效果,同时也可以检测野毒感染。试验4,我们用MDV的超强毒株RB1B和强毒株GA分别感染鸡后,比较不同致病型毒株对新城疫病毒(NDV)疫苗和传染性法氏囊病病毒(IBDV)疫苗抗体反应的影响。在测试RB1B毒株试验中,攻毒组与对照组各取40只鸡,2周龄时攻毒组腿肌注射RB1B株感染的鸡胚成纤维细胞悬液(约1500PFU/只)。在46日龄、57日龄、61日龄分别测试血清的HI滴度和抗IBDV抗体滴度。在测试GA株试验中,攻毒组35只鸡,对照组25只鸡,攻毒组于7日龄时腿肌注射GA株感染的鸡胚成纤维细胞悬液(约2000PFU/只)。于33日龄、42日龄、51日龄分别采血测试血清的HI滴度和抗IBDV抗体滴度。所有鸡按常规免疫程序进行NDV疫苗和IBDV（本文此处忽略..）疫苗免疫,攻毒组与对照组隔离饲养。试验4结果证明RB1B株试验中攻毒组与对照组比较,HI抗体滴度在46日龄、57日龄差异极显著,61日龄时,差异显著。表明RB1B株对新城疫疫苗的免疫应答影响显著。对法氏囊病毒疫苗免疫反应两组间无明显差异。强毒株GA感染鸡虽然对NDV疫苗免疫效果也有影响,但与超强毒株RB1B相比,后者感染鸡对疫苗免疫效果影响更严重,能造成更大的免疫抑制。本试验中,两个毒株RB1B和GA均对NDV疫苗免疫有明显的影WP=12响,但对IBDV疫苗的免疫影响未见显著差异。

以上为本篇毕业论文范文鸡贫血病病毒和马立克氏病毒实验室检测方法的建立和应用的介绍部分。

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