脂质体转染胞嘧啶脱氨酶基因（CD/5-FC）联合放射线治疗人直肠癌的实验研究

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脂质体转染胞嘧啶脱氨酶基因（CD/5-FC）联合放射线治疗人直肠癌的实验研究

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毕业论文范文题目：脂质体转染胞嘧啶脱氨酶基因（CD/5-FC）联合放射线治疗人直肠癌的实验研究，论文范文关键词：脂质体转染胞嘧啶脱氨酶基因（CD/5-FC）联合放射线治疗人直肠癌的实验研究
脂质体转染胞嘧啶脱氨酶基因（CD/5-FC）联合放射线治疗人直肠癌的实验研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：直肠癌是我国常见的恶性肿瘤之一，近年来发病率呈显著上升趋势。虽然在诊断与治疗技术上已有很大的发展，但过去的60年里，每年与癌相关的死亡率并未明显的下降。其原因之一在于传统的治疗手段如放疗、化疗、手术，在治疗肿瘤的同时对正常组织亦存在损伤，由于只有针性的杀伤肿瘤组织而对正常组织损伤较小的方法才会对肿瘤治疗更有效，因此，CD基因等自杀基因治疗（亦称分子化疗）肿瘤具有广泛的应用前景，且在美国被称为最有前途的治疗方案。鉴于脂质体转染基因具有安全性，不产生排异反应，可反复转染等优点，但不足是转染效率不如病毒载体高。如果将脂质体转染基因治疗和放疗结合起来，既可以利用放射线可能存在的促进转染作用，克服脂质体转染效率低下的不足，又可以应用CD/5-FC的可能存在的辐射增敏作用增强放射治疗的效果，使基因治疗与放射治疗有机的结合起来，无疑为恶性肿瘤的治疗又增加了新的手段和方法。目的明确放射线能否促进脂质体对直肠癌细胞的转染效率以及探讨CD/5-FC有否辐射增敏作用。将放射线联合脂（略..）质体转染CD基因对HR-8348直肠癌荷瘤鼠治疗，观察其疗效，从而为临床治疗直肠癌提供理论依据。方法（1）构建PXJ41/CD载体并经证实构建成功。（2）利用集落培养法建立HR-8348细胞的放射剂量存活曲线，（3）提取与制备pEGFP-N1荧光质粒。（4）接种HR-8348细胞2×105个/孔于6孔板中，37℃5%的CO2孵育箱培养16小时，细胞融和40~60%左右，按0、WP=82、4、8Gy不同剂量照射细胞，照射后1小时利用Lipofectin转染细胞。36小时后倒置荧光显微镜观察与比较荧光情况，同时计算转染效率。（5）脂质体转染CD基因与5-FC100ug/ml共同孵育72小时后，采用临床常用剂量2Gy进行照射，照射72小时后流式细胞仪检测细胞凋亡率，同时设空白对照组、单纯放射组（2Gy）、单纯CD/5-FC组3个对照组。（6）荷瘤裸鼠的制备及分组：将HR-8348细胞0.2ml（0.5×107细胞/ml）接种于4-5周BALB/C-nu/nu裸鼠右侧后肢外侧皮下，待瘤体长至长径达0.5cm后，用随机数字法将裸鼠分为4组，每组10只。实验组（CD/5-FC+放疗）：γ射线局部照射患肢，第0天起2Gy（本文此处忽略..）/day连续照射15天；对每个肿瘤于第0、4、8、12天放疗后多点注射200μlLipofectin-PXJ41/CD复合体；第3天始腹腔注射5-FC800mg/kg/day，连续12天。单纯CD/5-FC治疗组：除不进行放射线照射外余同实验组。单纯放射治疗组：对裸鼠进行屏蔽照射同实验组。空白对照组：生理盐水200ul于第0、4、8、12天瘤体多点注射。于治疗后第30天拉颈法处死各组裸鼠。绘制荷瘤裸鼠的肿瘤生长曲线，计算瘤体积抑制率及瘤重抑制率结果（1）0、2、4、8Gy的转染效率分别为21.32%、62.17%、68%、77.78%，放射各组与未放射组之间存在显著差异（χ2=137.1，P0.01），而且随着放射剂量的增加转染效率呈现上升趋势；（2）流式细胞术显示，细胞凋亡率（亚G1峰）分别为实验组是29.21%，空白对照组是0.72%，2Gy照射组是6.22%，单纯CD/5-FC组是11.82%。实验组为单纯放射组的4.70倍，为单纯放射组和单纯CD/5-FC组之和的1.62倍。各组间差异有显著性(χ2=113.74,P0.01）；（3）荷瘤鼠各组肿瘤生长曲线示：实验组治疗第8天起肿瘤生长曲线较为平缓，治疗效果显著且与各对照组有显著性（F=251.75，P＜（略..）0.01）。提取肿瘤组织、骨髓组织、心肌组织、肠组织的总RNA，进行RT-PCR证明实验组、CD/5-FC治疗组可WP=9扩增出353bp的片段，而两组中骨髓组织、肠组织和其余各组肿瘤组织无扩增片段。实验组扩增片段的灰度值明显高于单纯CD-5-FC治疗组；HE染色可见实验组的肿瘤细胞数目较单纯放射治疗组、单纯CD/5-FC治疗组、生理盐水注射组明显减少，肿瘤细胞呈退行性病变，代之以大量的脂肪细胞；实验组、单纯CD/5-FC治疗组和单纯放射治疗组的肿瘤体积抑制率为81.5%，48.54%、37.35%，瘤重抑制率分别为79.69%、41.67%、37.67%，实验组较单纯放射治疗组、单纯CD/5-FC治疗组差异有显著性(χ2=287.86，P0.01）)。结论(1)放射线具有提高脂质体转染HR-8348直肠癌细胞转染效率的作用，应用放射线后的转染效率与病毒载体转染效率接近。(2)CD/5-FC可增强放射线对HR-8348直肠癌细胞的杀伤作用，可成为一种辐射增敏剂。(3)利用脂质体反复转染CD基因联合放射线治疗HR-8348荷瘤鼠，肿瘤体积抑制率为81.5%，瘤重抑制率分别为79.69%，治疗效果显著，且无明显的毒副作（略..）用。(4)脂质体转染既保证了治疗的安全性又可反复应用，放射线可以克服脂质体转染的效率低下的问题，二者联合可显著提高对肿瘤杀伤作用。(5)本实验将基因治疗、化疗和放疗有机的结合起来，可产生协同作用，对直肠癌治疗疗效显著，这将为治疗恶性肿瘤提供了一个很好的思路，同时也为临床治疗癌症可能提供了有价值的理论以及实践的依据。

以上为本篇毕业论文范文脂质体转染胞嘧啶脱氨酶基因（CD/5-FC）联合放射线治疗人直肠癌的实验研究的介绍部分。

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