NO生成合剂对糖尿病小鼠创面愈合的促进作用

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NO生成合剂对糖尿病小鼠创面愈合的促进作用

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毕业论文范文题目：NO生成合剂对糖尿病小鼠创面愈合的促进作用，论文范文关键词：NO生成合剂对糖尿病小鼠创面愈合的促进作用
NO生成合剂对糖尿病小鼠创面愈合的促进作用毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的糖尿病(DiabetesMellitus,DM)是多病因引起的慢性代谢性疾病。皮肤病变如溃疡、坏疽、局部感染等是糖尿病患者极为常见的临床表现之一。创伤难愈并发症的出现与糖尿病患者皮肤组织的创伤愈合能力低下有直接关系。如何更快的促进创面修复,局部用药是一种重要的辅助治疗,而目前方法很多,但疗效往往不令人满意。本实验主要是利用NO在创面愈合中的重要作用,同时改变创面的微环境,为创面的愈合提供一种新的局部用药治疗方法:由促一氧化氮生成的L-精氨酸、硝普钠和超氧阴离子生成抑制剂夹竹桃麻素形成合剂,对糖尿病小鼠创面的进行联合应用,明确其方法在创面愈合中的作用。通过建立STZ诱导的I型糖尿病小鼠模型和创伤难愈模型,给予促NO合剂进行干预创面愈合过程,观察外源性药物在创伤愈合过程中对伤口愈合时间、肉芽组织生长及表皮细胞增殖的影响;应用免疫组化方法,揭示创面愈合时TGF-β1因子的表达规律和血管生成情况;通过光镜观察创面不同时间点的成纤维细胞数量及胶原纤维含量;研究NO合剂对创面愈合的影响,并探讨其机制,为临床上在治疗糖尿病难愈创面时提供理论依据。方法1.模型建立1.1建立STZ诱导的I型糖尿病小鼠模型小鼠标记称重后,连续4d腹腔注射STZ(50mg/kg),小鼠禁食不禁水10h,由尾静脉取血,连续8周跟踪检测小鼠的血糖浓度及体重变化。1.2建立ST（此处忽略..）Z糖尿病小鼠创伤难愈模型空腹血糖浓度高于11.1mmol/L,且连续出现多饮、多食、多尿者选为糖尿病模型小鼠。将小鼠以10%水合氯醛(30mg/kg)腹腔注射麻醉后,在背部中线两侧(间距1cm以上),以直径1cm打孔器打孔、止血,单笼喂养。跟踪检测其创口愈合速度直至完全愈合。2.NO合剂对小鼠创面愈合作用的观察实验分组:共设5个实验组,即糖尿病小鼠对照组、糖尿病小鼠L-精氨酸(L-Arg)治疗组(A组)、糖尿病小鼠夹竹桃麻素(APO)治疗组、糖尿病小鼠硝普钠(SNP)治疗组、糖尿病小鼠NO合剂治疗组,每组10只小鼠。给药方法:小鼠背部创面建立成功后,按照不同组别,分别以生理盐水、L-arg溶液(150g/L,去离子水配制)、APO溶液(1×10-4mol/L,去离子水配制)、SNP溶液(0.1mmol/L,去离子水配制)及NO合剂(L-arg、APO、SNP溶液等比混合,临用前配制)在相应组小鼠创面用无菌注射器皮下注射各0.15ml,隔天一次。标本采集:在治疗后的第1、3、5、7、10天,应用数码照相机拍下创面情况,记录愈合的面积。于伤后第3、7、10天分别取创缘组织,10%福尔马林固定,石蜡包埋连续性切片后,常规HE、VG染色,观察创面成纤维细胞、血管新生及胶原沉积等情况,评价创面愈合效果。2.1计算创面愈合率使用透明方格纸描绘创口,用计算机图像分析软件计算面积,并按以下公式计算创面愈合率:创面愈合率=(创面初始面积-创面形成（略..）后第n天的面积)/创面初始面积×100%。2.2成纤维细胞密度测定400倍光镜下观察HE染色切片,分别在组织中央浅部、中央深部、两侧部各随机选取10个矩形视野(0.0052mm2/视野),目测计数并计算切片内单位面积成纤维细胞数量。2.3.胶原纤维面密度测定400倍光镜下观察VG染色组织切片,分别在组织中央浅部、中央深部、两侧部各随机选取5个视野,利用HMIAS-2000高清晰度彩色医学图文分析系统计算红染的胶原纤维的面密度。3.NO合剂对小鼠创面血管生成和转化生长因子的研究3.1血管密度的测定以抗血管VIII因子抗体对标本进行免疫组织化学染色,操作步骤按照试剂盒说明书进行。参照weidne的评判标准:呈现棕色的单个内皮细胞或内皮细胞簇均作为1个血管计数,肌层较厚及管腔面积大于8个红细胞直径的血管均不计数。400倍光镜下在每张切片的中央区、周边区各随机选取5个血管密集的视野,取其平均数作为该标本的平均血管密度(MVD)。3.2转化生长因子测定以TGF-β1抗体对标本进行免疫组织化学染色,操作步骤按照试剂盒说明书进行。观察指标用光学显微镜(10×40倍)观察TGF-β1免疫阳性纤维的分布用Mplas-500多媒体彩色病理图文分析系统,通过显微摄像系统放大400倍,每张切片随机选取5个视野,在该视野中选定TGF-β1(+)标准,以图像分析系统自动测量出结果,单位μm2。采用SPSS10.0软件包进行统计学分析,所有计量数据以(X±S)表示,进（本文此处忽略..）行t检验,p0.05表示有统计学差异。结果1.连续8周跟踪检测小鼠的血糖浓度及体重变化;检测结果表明小鼠血糖浓度显著增高(p0.05),而体重明显下降(p0.05),且体征持续8周以上,与文献报道的STZ糖尿病小鼠模型一致;表明STZ在小鼠体内成功诱导I型糖尿病。2.STZ糖尿病小鼠创口的整个愈合过程比对照组明显滞后(p0.05),说明手术使STZ糖尿病小鼠出现了创伤难愈现象,也说明糖尿病严重损伤了小鼠皮肤组织的创伤愈合能力。3.对照组于创伤后16-18天可以基本愈合;NO合剂治疗组肉芽组织生长好,愈合时间较对照组提前3-4天。其他单剂治疗组愈合情况良好,较对照组提前1-2天,创面形成后第3天起,各药物治疗组小鼠创面愈合率较对照组明显上升,以创面形成后7d内变化最为明显。4.各实验组创伤后3天可见细胞增生、胶原形成,7-10天成纤维细胞增生明显,胶原纤维排列整齐;实验组在创伤后3、7天成纤维细胞数密度(NA)均高于对照组水平,而在创伤后10天均低于对照组;其中,NO合剂治疗组较各药物单剂治疗组差异更为明显,具有统计学意义(P0.05)。各组胶原纤维面密度(AA)均呈持续性增加的趋势,实验组在所有时间点AA均高于对照组(P0.05),单剂各组比较差异不明显5.TGF-β1阳性细胞比率:NO合剂治疗组用药后3天细胞阳性染色明显,3-7天细胞中的TGF-β1在细胞中的阳性表达增强并达到高峰,创伤后7-14天细胞中的阳性表达逐渐减弱至相对维持（文章此处忽略..）稳定水平。实验组在3、7天时间点的阳性表达均高于对照组(P0.01),对照组细胞中的阳性表达峰值明显滞后,且表达量少于其他组;而与其它单剂干预组组间比较差异不明显。6.NO合剂治疗组在创伤后3-7天内皮细胞增生活跃,较对照组有更多的毛细血管形成(P0.01),与其他单剂干预组比较,血管生成的数量亦有差异(P0.05)。对照组血管生成明显较少,且炎性反应较其他组严重。其中NO合剂治疗组与对照组的差异最为显著(P0.01),L-Arg、APO、SNP治疗组组间差异不明显。结论在糖尿病小鼠创面的愈合过程中单独使用L-精氨酸或硝普钠或夹竹桃麻素可以促进创面的愈合,而促NO合剂则对创面的愈合具有更好的修复作用,可以明显缩短糖尿病小鼠创面的愈合时间,较L-Arg、APO、SNP单独使用效果更为显著。

以上为本篇毕业论文范文NO生成合剂对糖尿病小鼠创面愈合的促进作用的介绍部分。

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