RNAi技术在黄瓜抗根结线虫遗传转化中的应用研究

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RNAi技术在黄瓜抗根结线虫遗传转化中的应用研究

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毕业论文范文题目：RNAi技术在黄瓜抗根结线虫遗传转化中的应用研究，论文范文关键词：RNAi技术在黄瓜抗根结线虫遗传转化中的应用研究
RNAi技术在黄瓜抗根结线虫遗传转化中的应用研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：根结线虫在引起黄瓜侵染性病害的四大病原中,正逐渐成为仅次于真菌、细菌病害的一类重要的植物病原物。黄瓜根结线虫病已成为影响黄瓜生产较突出的问题.根结线虫的防治方法包括栽培防病、化学防病和抗线虫品种培育。抗线虫品种培育一直是育种家追寻的理想途径,但由于种质资源的匮乏,仅靠现有资源和常规育种方法很难育出抗线虫的黄瓜品种。利用生物技术辅助传统育种是解决抗源匮乏的有效途径。通过基因工程提高植物抗逆性技术早已在黄瓜育种中探索应用。RNA干扰(R（文章此处忽略..）NAi)是目前分子生物学研究的热点之一,是一种由同源序列引发的基因沉默现象。由于黄瓜组织培养困难,再生率较低,再生周期长,因而很少生物技术工作者选择黄瓜作为遗传转化的受体。因此,本试验着重开展了黄瓜高效植株再生体系的研究,黄瓜抗根结线虫RNAi载体的构建,农杆菌介导和花粉管导入技术转化黄瓜的研究,研究结果如下:(1)筛选出较为优化的黄瓜再生体系。取材时间以播种2天苗龄的子叶为最佳接种苗龄;取材部位以近叶柄端子叶为最佳再生外植体材料;最佳芽诱（略..）导培养基是MS+6-BA1mg·L-1+ABA1mg·L-1+Ades20mg·L-1;培养早期Ades和ABA的存在能降低POD的含量,促进不定芽的再生。(2)构建了抗根结线虫的RNAi表达载体。提取带有根结线虫的黄瓜根系总RNA,利用RT-PCR扩增出根结线虫保守基因16D10,连接到T载体pMD-18上,测序表明所扩增的序列与已发表的四种主要根结线虫(南方根结线虫、爪哇根结线虫、花生根结线虫和北方根结线虫)序列具有很高的同源性,然后将16D10基因正向和反向插入到pBL（略..）UE载体上,构建了双链载体pBLUE-22-21,并将此双链基因插入到由35S启动子调控的克隆载体pRTL2上,命名为pRTL2-22-21,再将含有启动子和终止子以及双链的目的片段插入到双元表达载体pBIN-19上,得到表达载体pBIN-22-21。(3)研究了影响农杆菌介导的黄瓜遗传转化因素。不同基因型黄瓜品种对抗性芽数影响很大,鲁黄瓜8号适合作为转化材料;不同发育时期的子叶直接诱导黄瓜抗性芽的潜能不同,当两片子叶将要脱离种壳,子叶露出部分为绿色时进行外植体切割产生的抗（文章此处忽略..）性芽多;黄瓜对Kan较敏感,采用延迟筛选法进行筛选;同一浓度的Carb和Cef对黄瓜芽分化没有明显的差异,但综合抑菌效果,选择Cef300mg·L-1或者是Carb500mg·L-1作为抑菌剂。(4)研究了花粉管通道法介导的黄瓜遗传转化。不同注射方法影响坐果率,采用授粉后24h后用刀片沿柱头与子房颈分处切去柱头的方法较好。

以上为本篇毕业论文范文RNAi技术在黄瓜抗根结线虫遗传转化中的应用研究的介绍部分。

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