HMGB1对Th17细胞的诱导及其在类风湿性关节炎中作用机制的初步探

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HMGB1对Th17细胞的诱导及其在类风湿性关节炎中作用机制的初步探

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毕业论文范文题目：HMGB1对Th17细胞的诱导及其在类风湿性关节炎中作用机制的初步探，论文范文关键词：HMGB1对Th17细胞的诱导及其在类风湿性关节炎中作用机制的初步探
HMGB1对Th17细胞的诱导及其在类风湿性关节炎中作用机制的初步探毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的:克隆并鉴定鼠HMGB1基因;原核表达HMGB1蛋白,制备多克隆抗体;检测类风湿性关节炎患者外周血中高迁移率族蛋白1(highmobilitygroupboxchromosomalprotein1,HMGB1)及Th17主要转录因子及相关细胞因子的表达水平,分析HMGB1、Th17细胞相关因子及某些临床检验指标之间的相关性;通过体外HMGB1对Th17细胞的诱导作用,初步探讨HMGB1在类风湿性关节炎中可能的作用机制。方法:1)采用RT-PCR方法从小鼠脾脏细胞获得HMGB1基因全长,克隆至pMD18-T载体,转化E.coliDH5α宿主菌,挑取菌落进行进行单、双酶切鉴定及序列分析。2)将HMGB1基因克隆到pET28原核表达载体,在大肠埃希菌Rossta中表达（略..）,获得带有His标签的30KD左右的HMGB1融合蛋白;利用Bio-Rad公司的IMAC柱纯化HMGB1蛋白;用抗-His抗体对HMGB1融合蛋白进行Westernblot鉴定。以HMGB1蛋白作为抗原免疫家兔,收集含抗HMGB1多克隆抗体的兔血清,并用酶联免疫吸附(ELISA)法鉴定抗体的效价。3)收集江苏大学附属医院-镇江市第一人民医院门诊80例类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis,RA)患者外周血标本,其中静止期32例、活动期48例,健康志愿者50例。4)HMGB1与小鼠CD4~+T细胞的共培养。5)采用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)及ELISA检测标本PBMC中HMGB1及Th17相关因子的表达水平。6)采用流式分析(FACS)法检测标本中CD3~+CD（略..）8~-IL-17~+细胞的比率。结果:1.鼠HMGB1基因克隆,表达及多克隆抗体制备结果1)成功克隆了包括648bp编码区的鼠HMGB1基因全长,与Genebank中发表的序列完全一致。2)在大肠埃希菌经诱导和纯化获得HMGB1融合蛋白,大小约为30KD。3)成功制备了针对鼠HMGB1蛋白的多克隆抗体,经ELISA和Westernblot鉴定,具有良好的反应性,也表明融合蛋白具有良好的免疫原性。2.RA病人相关检测分析结果1)QRT-PCR分析结果显示:与健康对照组比较,RA患者组PBMC中HMGB1及Th17细胞的主要转录因子RORγt和相关的细胞因子IL-17mRNA表达水平显著升高(P＜0.05);活动期RA患者高于静止期患者表达水平(P＜0.05)。相关性分析表明,RA患者HM（本文此处忽略..）GB1与Th17细胞相关因子表达水平有明显相关性。2)ELISA检测结果显示:RA患者血浆IL-17、IL-23呈高表达,与健康对照组差异明显(P＜0.05)。3)流式分析结果显示:RA患者CD3~+CD8~-IL17~+T细胞比率部分明显高于健康对照组。3.HMGB1体外诱导Th17细胞的试验结果HMGB1刺激小鼠CD4~+T细胞结果显示:HMGB1对Th17的诱导呈现时间剂量效应,在浓度为100ng/ml作用12h对Th17细胞有最佳的诱导效果。结论:获得了鼠HMGB1基因克隆并制备和纯化了鼠HMGB1蛋白及多克隆抗体;类风湿性关节炎患者PBMC中HMGB1和Th17细胞的表达水平高于健康者,且RA患者HMGB1的表达与Th17细胞相关因子及临床检测指标的表达均呈现正相关,说明HMGB1与RA的发（略..）生相关;体外HMGB1对Th17细胞有诱导分化的作用,表明作为组织损伤信号的HMGB1,除在组织损伤局部招致吞噬细胞发挥早期抗感染作用外,在慢性免疫炎症损伤过程中,也可通过对免疫细胞的调节作用参与和加重炎症损伤程度,构成RA病理过程的一部分。这为进一步研究HMGB1在RA中的作用和探讨基于HMGB1干预的治疗途径奠定了基础。

以上为本篇毕业论文范文HMGB1对Th17细胞的诱导及其在类风湿性关节炎中作用机制的初步探的介绍部分。

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