大鼠脊髓伤害修复相干基因的分别与初步分析

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大鼠脊髓伤害修复相干基因的分别与初步分析

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毕业论文范文题目：大鼠脊髓伤害修复相干基因的分别与初步分析，论文范文关键词：大鼠脊髓伤害修复相干基因的分别与初步分析
大鼠脊髓伤害修复相干基因的分别与初步分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：脊髓伤害(spinalcordinjury,SCI)是一类高致残率的中枢神经体系(centralnervoussystem,CNS)疾病，SCI的医治始终是困扰神经生物学的重大困难。近年来科学家尝试用多种手段医治脊髓创伤，如外周神经移植、胚胎脊髓组织移植、细胞医治跟基因医治等，获得了明显进展。但这些医治手段重要侧重于外界因素对神经再生的影响，因为脊髓伤害后修复的分子机理还不明白，因此无奈针对在修复过程中起关键作用的分子进行直接、有效的干涉。脊髓伤害后的修复过程中在基因程度上产生一系列复杂的变更，包含基因表白、构（本文此处忽略..）造跟功能的改变，某些变更可能直接影响伤害后的修复过程。探讨脊髓伤害修复的分子机理、寻找医治SCI相干疾病的合适的药物靶标已经成为急切须要解决的问题。目前，这方面的研究重要着眼于伤害后较短时光内(1h-3d)基因表白谱的变更，对于修复过程中分子程度的变更至今未见报导。本研究的目标在于寻找在脊髓伤害后的修复过程中起关键作用的分子，为临床医治SCI提供合适的药物靶标。近年来崛起的消减杂交技巧是分别组织或细胞间差别基因的有效方法。本实验采取基于PCR的消减杂交方法，并在经典消减杂交的基本上引进了一些新的技巧，如Cap-（此处忽略..）finder技巧、长间隔PCR、Biotin-dNTP、磁性分别体系跟Sephacryl离心柱分别技巧。在树破的伤害修复模型基本上，通过两轮改进消减杂交构建脊髓伤害后4.5天的cDNA消减文库。该文库的扣除效力，通过钓取管家基因G3PDH跟伤害脊髓中高表白基因basigin进行了鉴定，成果表明消减杂交后G3PDH的丰度大大降落，而basigin在消减文库中的丰度明显增加。两轮杂交后的目标cDNA扩增产物转化大肠杆菌JM109，随机挑取110个克隆进行酶切鉴定，并对重组质粒进行测序分析，去除反复序列后初步筛选得到51个差别克隆。（此处忽略..）进一步通过反向点杂交剔除11个假阳性克隆，终极得到40个差别克隆。根据测序成果对部分差别序列设计引物，进行半定量RT-PCR验证。而后将40个差别序列与Genbank序列数据库进行同源性比较，分析发明其中32个是已知基因，其余8个为新基因。32个已知基因中，包含Synuclein、Clusterin、Gaa、Vimentin、Reticulon、Neurofascin等与神经体系发育、退行性病变、神经细胞的存活及轴突延长密切相干的分子。对8个未知基因片段进行了较为全面的生物信息学分析，应用SMART功能分析软军事医学科学院硕士（此处忽略..）学位论文件对开放读框进行功能域搜查，成果显示69号基因ORF末端含有一Leu拉链构造，该构造是转录因子与其DNA调控序列进行特异结合的保守构造域之一，目前发明重要存在于一些与细胞周期调控相干的分子中，与细胞成长、分化跟调控密切相干。因此69号基因可能是在脊髓伤害修复过程中起关键作用的调控因子。而后应用CDNA末端疾速扩增法（RACE）对69号克隆的了跟3’末端进行扩增，得到了5’末端序列，为深刻研究它在脊髓伤害修复过程中的功能奠定基本。

以上为本篇毕业论文范文大鼠脊髓伤害修复相干基因的分别与初步分析的介绍部分。

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