原代培养大鼠脑星形胶质细胞液压冲击伤害后蛋白差别性表白的研究

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原代培养大鼠脑星形胶质细胞液压冲击伤害后蛋白差别性表白的研究

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毕业论文范文题目：原代培养大鼠脑星形胶质细胞液压冲击伤害后蛋白差别性表白的研究，论文范文关键词：原代培养大鼠脑星形胶质细胞液压冲击伤害后蛋白差别性表白的研究
原代培养大鼠脑星形胶质细胞液压冲击伤害后蛋白差别性表白的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目标:树破原代培养星形胶质细胞液压冲击伤害模型,利用双向电泳结合质谱技巧察看脑皮质星形胶质细胞液压冲击伤害后蛋白质组的表白变更,探寻脑伤害的特异性生物标记蛋白。方法:取出生后24h内SD大鼠(军事医学科学院实验动物核心提供)大脑皮质组织,于含有10%胎牛血清的DMEM-F12培养基中进行星形胶质细胞体外分别培养跟纯化,并以胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学染色进行纯度鉴定。随机将细胞分为对比组跟伤害后4h、8h、12h、24h、48h组,复制Scott's细胞液压冲击伤害模型(0.2MPa)。用台盼蓝染色察看星形胶质细胞伤害前后状况学变更,测培养液中LDH活力反应细胞的伤害程度,PI/Hoechst33342染色进行凋亡分析。提取细胞总蛋白,经双向电泳跟MALDL-TOF质谱分析鉴定差别蛋白质。成果:1星形胶质细胞原代培养跟纯化:经2-3次摇床传代纯化培养后的星形胶质细胞状况均一,胞体较大而扁、胞质（文章此处忽略..）较丰富、外形不规矩;胞突丰富、分支多呈喷射状,一级胞突较粗,常有二级分支;胞核圆形或卵形,常偏于胞体一侧。培养至24-26d,细胞成长状况良好,铺满皿底,构成大抵均一的扁平细胞层。2星形胶质细胞的纯度鉴定:采取GFAP免疫细胞化学染色(SP法),计数成果显示培养的星形胶质细胞纯度可达94.9%±1.9%。3液压冲击伤害后星形胶质细胞状况学的改变:光镜下察看,细胞随时光产生缝隙增大、肿胀、变圆、恢复,部分细胞产生皱缩、胞膜决裂、脱壁等明显的状况学改变;PI/Hoechst33342(1:1)荧光双染可见凋亡细胞。4液压冲击伤害后细胞培养液中LDH的变更:与畸形对比组细胞培养液比拟,伤害后各组细胞培养液中LDH活力均降落,4h组降至最低,与对比组比拟有统计学差别(P0.05)。而后其它组逐步回升,48h组与对比组比拟无统计学差别(P0.05)。5液压冲击伤害后星形胶质细胞双向电泳图谱分析:双向电泳图谱经PDquest软件分析（略..）检测到的各组总蛋白点数:对比组1369±56,4h组1325±94,8h组1136±81,12h组1197±112,24h组1257±63,48h组1176±73。蛋白点多分布于pI5.2-6.6、MW30kDa-70kDa的范畴;以对比组为参考胶,均匀图谱匹配率达82%以上。伤害后共有265个蛋白质点的绝对强度与畸形对比组比拟有明显性差别(P0.05),其中38个蛋白质点在伤害后表白升高,111个蛋白质点在伤害后表白降落,45个蛋白质点为伤害后新表白,有71个蛋白质点在伤害后各组均未表白。6差别蛋白质的质谱鉴定:对9个差别蛋白点行MALDI-TOF质谱鉴定,其中8个点得分大于61分(P0.05),分辨为60S酸性核糖体蛋白P2(60SacidicribosomalproteinP2)、细胞视黄醇结合蛋白(cellularretinolbindingprotein,Crbp)、脑脂肪酸结合蛋白7(brainfattyacidbindingprotein7,FABP7)、S-100钙结合蛋白A11(S100calciumbindingproteinA11,S100A（文章此处忽略..）11)、假设蛋白LOC685814(hypotheticalproteinLOC685814)、真核生物翻译起始因子1A(Eukaryotictranslationinitiationfactor1A,eIF-1A)、乳腺癌扩增序列2同源体(Breastcarcinomaamplifiedsequence2homolog,BCAS2)、钙结合蛋白3(calponin3)。其中对FABP7行Western-blot验证,成果显示:FABP7在星形胶质细胞中存在表白,而且该蛋白在星形胶质细胞液压冲击伤害后的变更趋势与双向电泳图像经PDQuest软件分析后得到的蛋白量变更趋势相一致。论断:1液压冲击伤害可引起星形胶质细胞状况学产生改变,且有必定的时光依从性。2液压冲击伤害能导致星形胶质细胞蛋白质组表白产生变更,伤害后共有265个蛋白点的绝对强度与畸形对比组比拟有明显性差别,对其深刻研究,有可能探寻到脑伤害的生物标记蛋白。3经M（略..）ALDL-TOF质谱分析初步断定的8种蛋白大抵分为代谢调节、信号转导调节、翻译起始相干类及其它等四类,这些蛋白表白的变更表明它们在参加星形胶质细胞伤害后早期反应、促进细胞功能恢复、克制细胞继发性伤害、参加细胞骨架组织重组及改良蛋白质合成等环节起重要作用,对其进前进一步研究,有望深刻懂得脑伤害的分子机制。

以上为本篇毕业论文范文原代培养大鼠脑星形胶质细胞液压冲击伤害后蛋白差别性表白的研究的介绍部分。

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